利用RNAi技术沉默拟南芥MAPK2基因筛选mapk2突变体

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该实验利用PCR技术,克隆拟南芥的MAPK2基因(AT1G59580)中的一端序列(650bp),并将这一基础片段分别以正向和反向插入双源载体Pfgc5941的两个多克隆位点中,构建pFGCmpk2ds.并将其转入农杆菌菌株LBA4404中,通过Floral dip法转化拟南芥.收获后的种子形成植株后用PPT进行筛选,获得25株潜在的转基因植株.通过对其MAPK2基因mRNA水平的检测表明,其mRNA含量明显减少,说明其即为RNA干涉.与同条件下正常生长的野生型相比,所获得的突变体大都表现出与野生型不同的形态特征,表现为莲座叶增多、或分层,花芽萌发时缺乏顶端优势,次级共序生长增强等.这些差异可能暗示了MAPK2在发育过程中的作用,以及这种差异与生长素的信号转导途径的关系,但其作用机制仍需进一步研究.
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