人细小病毒B19(Human parvovirus B19,B19V)和人细小病毒4(Human parvovirus 4,PARV4)可以感染人类,且可经血液及血液制品传播。我国捐献血液/血浆时未对其中的B19V和PARV4进行检验,我国血液制品企业在生产血液制品时也未对它们进行筛查,且常规的病毒去除/灭活技术难以有效地将人细小病毒去除/灭活。血源性人细小病毒(B19V和PARV4)的存在对我国捐献的血液/血浆和我国血液制品的使用存在着不可忽视的安全隐患。因此,B19V和PARV4对临床用血和血液制品的潜在威胁越来越引起人们的关注。为了更好地保障我国临床用血和血液制品的病毒安全性,我们有必要对我国献血/献浆人群中的B19V和PARV4进行分子流行病学分析。因此,在本研究的第一部分,我们使用B19V-PARV4双重核酸检测体系对我国西安地区3200例单人份献血者血浆和我国某血液制品企业54份混合原料血浆进行了B19V和PARV4的核酸检测。为了解B19V不同基因型的分布状况,本研究基于B19V基因组中NS1-VP1u区的核苷酸序列或基因组近全长序列进行克隆测序后,经多重序列比对,最后基于此NS1-VP1u区的核苷酸序列或基因组近全长序列进行了系统发育分析,对B19V核酸阳性血浆样品进行了毒株的基因分型。结果显示,在我国西安地区3200例单人份献血者血浆中,B19V核酸阳性的样品有12份,总阳性率为0.38%;而PARV4核酸阳性的样品有4份,总阳性率为0.13%。B19V核酸阳性样品中有4份样品鉴定为1a亚型,2份样品鉴定为1b亚型。在我国某血液制品企业54份混合原料血浆中,B19V核酸阳性的样品有5份,总阳性率为9.26%;而PARV4核酸阳性样品有11份,总阳性率为20.37%。B19V核酸阳性样品中有1份样品成功进行了基因组近全长克隆,其基因型鉴定为1b亚型。B19V感染宿主细胞并造成细胞损害或引起宿主细胞死亡。当宿主细胞的自噬水平提高时,被B19V感染的宿主细胞更容易存活。鉴于被B19V感染的细胞存在此种现象,我们认为对B19V的蛋白功能进行细胞自噬方面的研究是有必要的。多数病毒在感染细胞后,会在宿主细胞的内质网内合成大量的病毒蛋白,引起细胞内质网应激。内质网应激可能与细胞自噬存在一定的联系。因此在本研究的第二部分,我们进行了B19V蛋白在诱导细胞自噬和内质网应激方面的初步探索。我们通过分子克隆和细胞转染技术使UT7/Epo-S1细胞中表达B19V的非结构蛋白X和7.5kDa。然后,通过LC3B-Ⅱ的转化分析和研究膜型LC3B在自噬小体膜上的聚集来鉴定细胞自噬的诱导情况。结果显示非结构蛋白7.5kDa可以诱导UT7/Epo-S1细胞自噬,而X蛋白没有这种效果。这表明在B19V诱导宿主细胞自噬的分子机制中,非结构蛋白7.5kDa可能发挥着重要的作用。通过免疫印迹分析了转染细胞中的内质网应激相关蛋白Bip和CHOP的表达情况,结果显示非结构蛋白X和7.5k Da的存在不能使UT7/Epo-S1细胞中Bip蛋白和CHOP蛋白的表达发生显著地上调。这表明非结构蛋白X和7.5kDa不能诱导UT7/Epo-S1细胞产生内质网应激的效应。综上所述,本研究内容分成两部分。第一部分为我国献血/献浆人群中人细小病毒B19和人细小病毒4的分子流行病学分析,并对其中存在的B19V进行了基因型鉴定。这部分研究工作有助于我们了解B19V和PARV4在我国的流行状况和B19V不同基因型在我国的分布状况,并为更好地保障我国血液制品的病毒安全性提供必要的基础性数据。第二部分为人细小病毒B19非结构蛋白7.5kDa和X在诱导细胞自噬和内质网应激方面的功能研究,对阐明B19V感染细胞的分子机制有一定的参考和借鉴意义。