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一氧化氮(Nitric Oxide,NO)是一种第二信使,在癫痫发生发展的细胞病理过程中起着非常重要而又复杂的调节作用。但现有报道存在很多截然相反的结论,对NO的作用不能明确定性。 本研究首先从检测方法学的角度,通过使用激光扫描共聚焦显微技术和荧光标记技术,在国内外首次建立了一种实时测定神经元胞内NO水平的方法。与传统方法相比,该方法具有实时动态,高度灵敏、特异和精确等特性。 接着为了证实该方法的可靠性和实用性,我们对青霉素刺激的体外海马神经元兴奋模型中NO的实时动态合成进行了成功检测。研究同时首次发现不同剂量青霉素刺激下两种截然不同的NO合成动力学模式。 为考察两种NO合成动力学模式蕴涵的真正生理意义,我们在证实胞外谷氨酸(Glutamate,Glu)水平与细胞兴奋性宏观状态(产生动作电位的阳性细胞比例)正相关的情况下,以Glu水平为指标,研究NO与细胞兴奋性的关系。结果发现在晚而慢的NO合成动力学模式下,NO抑制细胞兴奋;而在早而快的NO合成动力学模式下,NO促进细胞兴奋。 最后,本研究考察了NO调节细胞性的分子基础,发现NO通过抑制亮氨酸脑啡肽(M-ENK)水平来抑制细胞兴奋;通过升高M-ENK水平,抑制强啡肽-B(DYN-B)水平促进细胞兴奋。我们还试图探讨NO是否通过影响Glu受体(NMDAR)密度来调节M-ENK和DYN-B水平,但研究结果不支持上述结论。 上述研究为NO相关的药物筛选提供了新的平台,为癫痫病理研究的进一步深入提供了新的思路。