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目的:小胶质细胞大量激活和炎症因子的释放可以导致黑质多巴胺能神经元变性死亡,与帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)的病理进程密切相关。鉴于此,积极寻求抑制小胶质细胞过度激活及炎症因子释放的新靶标,可能有助于帕金森病的治疗。本课题前期研究发现普列克底物蛋白同源结构域家族蛋白PHLDA1(Pleckstrin homology-like domain,family A,member 1)参与调控小胶质细胞激活,本文旨在深入研究PHLDA1在小胶质细胞介导神经炎症的作用及分子机制,并进一步探究PHLDA1在多巴胺能神经元保护中的作用。方法:(1)利用BV-2小胶质细胞系,采用实时定量PCR和蛋白印迹法观察不同Toll样受体激动剂刺激后,PHLDA1的表达情况,确定其响应LPS的变化情况;(2)利用基因干扰技术,敲低PHLDA1后,观测LPS刺激前后TNF-α、IL-1β、i NOS和COX-2等炎症因子释放表达变化,检测LPS诱导的IKKα/β磷酸化、IκBα磷酸化、IκBα降解、NF-κB p65亚单位核转位以及NF-κB报告基因活性,初步探究PHLDA1在NF-κB信号通路激活中的作用;(3)利用免疫共沉淀等方法,测定PHLDA1与TRAF6的相互作用,观察其对TRAF6 K63位泛素化的影响,进一步探究PHLDA1参与炎症调控的机制;(4)利用腺相关病毒进行小鼠中脑黑质部位体内干扰,在此基础上构建MPTP诱导的PD模型,对小鼠进行行为评价,观测神经炎症、神经元存活等生化指标,考察PHLDA1调控炎症对神经元的影响,以及在疾病模型中的作用。结果:(1)BV-2小胶质细胞系在不同Toll样受体激动剂刺激后,PHLDA1的表达程度各异,在Pam3CSK4和LPS刺激后表达上调,poly(I:C)刺激后无明显变化;(2)PHLDA1敲低后,LPS刺激前后TNF-α、IL-6、i NOS和COX-2等炎症因子产生显著降低,缺失PHLDA1可减弱LPS诱导IKKα/β、IκBα磷酸化、IκBα降解、NF-κB p65核转位以及NF-κB转录活性;(3)机制探究表明PHLDA1与TRAF6直接相互作用,其外源共表达可促进TRAF6 K63位泛素化,增强炎症信号,缺失PHLDA1可减弱LPS诱导的TRAF6 K63位泛素化;(4)在体实验中,黑质部位PHLDA1敲低,可以改善MPTP诱导的小鼠运动障碍,减少小胶质细胞活化释放的炎症因子,减弱其对多巴胺能神经元的神经毒作用。结论:PHLDA1在炎症激活的小胶质细胞中表达上调,缺失PHLDA1抑制LPS诱导的NF-κB信号通路的激活和炎症因子表达;PHLDA1缺失可通过减弱TRAF6K63位泛素化来调控小胶质细胞的激活,减少炎症因子释放产生的神经毒作用,促进多巴胺能神经元的生存。PHLDA1或可成为PD防治的一个潜在靶点。