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第一部分 肺鳞癌患者基因突变与PD-L1表达的研究[目的]探寻肺鳞癌潜在关键基因突变与PD-L1表达之间的关系及基因突变在指导肺鳞癌免疫治疗的临床意义。[材料和方法]回顾分析了 2015年1月至2019年1月在我院确诊为肺鳞状细胞癌的患者的临床病历资料和随访资料,统计分析了临床病理特征和免疫治疗相关信息。收集上述患者的存档病理石蜡标本,利用NGS技术检测基因突变情况,利用免疫组化染色检测PD-L1表达情况。采用Graphpadprism 8.0软件包分析突变基因、PD-L1表达、各临床病理特征及免疫治疗疗效之间的关系。[结果]1.共发现了 110个肿瘤相关基因314个突变类型。其中突变较为多见的基因有 TP53(69%),PIK3CA(33%),HER2(23%),FGFR1(21%),PTEN(21%),VEGFR2(21%)。2.PD-L1表达范围为0-100%,中位表达值为10%。分别采用1%、5%、25%和50%作为阳性截断值分析,PD-L1表达阳性率分别为82.1%、71.8%、28.2%和15.4%。3.不同阳性截断值时,PD-L1表达状态与患者KPS评分和淋巴结转移情况有关。当阳性截断值为5%,PD-L1 阳性表达患者出现KPS<90的情况相对较多。阳性截断值为25%和50%时,PD-L1 阳性表达患者出现KPS=90的情况相对较多。而当阳性截断值为50%时,PD-L1阴性患者相对于阳性患者出现对侧肺门淋巴结、纵隔淋巴结、同侧或对侧斜角肌或锁骨上淋巴结的转移的趋势更高。4.不同阳性截断值时,PD-L1表达与TP53、PIK3CA、ROS1、MLH1基因突变有关。阳性截断值为1%时,TP53基因突变在PD-L1阳性表达组的突变发生率有更高的趋势。阳性截断值为5%时,TP53、PIK3CA基因突变发生率在PD-L1表达阳性组有更高的趋势。阳性截断值为50%时,ROS1基因突变(非基因融合突变)、PIK3CA和MLH1在PD-L1表达阴性组出现的频率更高。5.PD-L1表达越高,患者越有可能从免疫治疗中获益。但本研究因样本量受限,未明确分析出基因突变与免疫治疗疗效之间的关系。[结论]肺鳞癌是一种具有独特病理学和分子生物学特征的非小细胞肺癌。其PD-L1表达与患者的KPS评分、淋巴结转移及TP53、PIK3CA、ROS1、MLH1基因突变有关。PD-L1表达越高,患者使用免疫治疗获益可能性越大。基因突变指导免疫治疗的临床价值有待进一步大样本量分析确认。第二部分miRNA在早期胰腺导管细胞腺癌预后价值的探讨[目的]采用系统生物学即基因加权共表达分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)的方法分析PDAC患者miRNA表达谱数据,找出影响胰腺癌发生和进展的部分关键miRNA,探索其潜在生物学机制并构建PDAC的miRNA预后预测模型。[材料和方法]本研究通过人类癌症基因图谱数据库(The Cancer Genome Atlas,TCGA)获取了 PDAC患者的miRNA表达谱和相应临床数据。采用WGCNA方法构建共表达网络检测出与部分临床特征显着相关的miRNA基因模块。通过基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都百科全书基因和基因组途径(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析对与临床特征相关的miRNA模块中的枢纽miRNA进行生物学功能注释。最后,使用R语言程序包’rbsurv’中鲁棒性分析筛选构建由枢纽miRNA构成的预后模型,并通过生存分析进行验证。[结果]共有124名PDAC患者的523种miRNA的表达谱数据进行了共表达网络分析。其中,含有131种miRNA的绿松石色基因模块与病理T分期相关(cor=-0.21;P=0.02)。使用R语言中“networkScreening”函数筛选出绿松石色模块的39个枢纽miRNA。通过对这些枢纽miRNA的勒靶基因进行预测,并对靶基因采用GO和KEGG富集分析发现,这39个枢纽miRNA参与调控的主要生物过程为转录调节、凋亡过程、TGF-β受体信号传导途径、Ras蛋白信号转导,参与调控的主要细胞信号通路有细胞周期、粘附连接、FoxO、Hippo和PI3K-Akt信号传导通路。通过鲁棒性分析,与病理T分期相关的绿松石色模块中的4种枢纽miRNA(miR-1197,miR-218-2,miR-889和miR-487a)构成的预后预测模型,能够将根治性手术后的早期PDAC患者分为了高风险组和低风险组。[结论]4 种 miRNA(miR-1197,miR-218-2,miR-889 和 miR-487a)构成的模型可作为行根治性切除术的早期PDAC患者潜在的预后生物标志物。