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本论文主要探索性的研究了接头蛋白NRBP (nuclear receptor binding protein)和蛋白酶caspase-10g的结构和功能,分别揭示了它们在细胞信号转导通路AP-1、NF-κB及细胞凋亡通路中可能的作用机制。NRBP是一个新发现的接头蛋白(adapter protein),由535个氨基酸构成,拥有结合SH2的结构域,核受体结合域,核输出信号和核定位信号。目前关于它的功能研究并不多,然而已有的结构域提示其可能在多个细胞信号通路中发挥重要作用。我们首先应用酵母双杂交方法筛选得到NRBP的结合蛋白Jab1(Jun activating binding protein 1),进一步的免疫共沉淀实验验证了两者在生理条件下相互作用。Jab1是COP9复合物的第五亚基,能够通过与c-Jun的结合,诱导c-Jun的磷酸化,即而激活转录因子AP-1信号通路。本研究运用荧光素酶报告基因检测方法及免疫印迹方法,发现NRBP显著抑制Jab1诱导的c-Jun的磷酸化及转录因子AP-1的活性。过表达NRBP特异性的显著抑制PMA或T细胞受体(TCR)激活的AP-1活性,活化T细胞核因子(NFAT)与AP-1经常通过协同作用共同调节基因的转录,过表达NRBP也显著抑制了T细胞中PMA/Ionomycin或TCR激活的转录因子NFAT活性,但不影响PMA或TCR诱导的CD69蛋白(T细胞活化表面标记蛋白)的表达,提示NRBP可能通过与Jab1的结合,在TCR通路的下游行使负调控作用。综合以上研究结果说明,NRBP能够特异性的负调控Jab1的转录激活功能,并可能是T细胞活化的负调控因子。这一新的发现为最终全面揭示NRBP在AP-1等细胞信号转导通路中的作用机制奠定了基础。Caspase-10是死亡受体介导的凋亡途径中重要的启动型caspase。目前已知caspase-10具有六个不同的剪切体(caspase-10a～f)。本论文的另一研究主要运用生物信息学及分子生物学方法,成功预测并克隆到一个caspase-10新剪切体,命名为caspase-10g,并对其功能进行了研究。Caspase-10g蛋白由247个氨基酸组成,它只含有死亡结构域组成的原结构域(prodomain),而不含有催化域。Caspase-10g基因在caspase-10基因第五和第六外显子之间拥有一个独有的外显子,造成蛋白产物在原结构域后很快终止。应用RT-PCR技术,我们检测到caspase-10g广泛存在于人的正常组织中,并且在几种肿瘤细胞株中也有表达。更进一步的免疫印迹实验证实,在肿瘤细胞HeLa及Jurkat中存在内源的caspase-10g蛋白。应用荧光素酶报告基因检测体系,我们发现caspase-10g显著激活核转录因子NF-κB活性,并且这种作用表现出剂量依赖性效应和时间依赖性效应。接下来的实验显示,作为只含有原结构域的剪切体,caspase-10g激活NF-κB的能力要远大于含有完整催化域的剪切体caspase-10a。细胞凋亡实验提示过表达caspase-10g能够轻度诱导细胞凋亡,然而这种能力远远低于含有完整催化域的剪切体caspase- 10a。本研究的意义在于发现了只含有原结构域的新剪切体caspase-10g,caspase-10g具有显著激活NF-κB活性的特性,其诱导凋亡的能力稍低,这提示其很可能在凋亡的信号通路中起着复杂的调控平衡作用,后续研究将有助于将其作为治疗肿瘤及免疫疾病的靶点。