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研究背景:随着我国基本国策的长期实施,我国老年人口的比例直线上升。老年人血管基础较差加上生活饮食习惯的改变,加大了脑血管病的发生机率,另外,现代生活模式的转变,使得人们运动量极少,这使得脑血管病的发病年龄呈现年轻化的趋势。脑血管病的高发病率、复发率、高致残率以及高额治疗费用已受到社会各界的重视。其中缺血性脑血管病在脑血管病中占到很大比重,约2/3。在人体的各种组织中,脑组织对缺氧的敏感性最高,大脑持续缺血缺氧4min就会造成永久性的损伤。患者因此出现的神经功能缺损症状恢复较慢甚至无法恢复,恢复到患病前程度的患者少之甚少。近年来,影像学的发展给脑血管病的诊断与分型提供了很大的便利,亦给治疗提供了方向,因此出现了很多新药。但是脑血管病的具体病理生理机制有待进一步研究。有大量的研究证实,在急性缺血性脑损伤中,氧化应激介导了脑组织的损伤。目的:通过经典的线栓法成功建立大鼠急性永久性局灶性脑梗死(pMCAO)模型,测定脑组织中核因子E2相关性因子2(Nrf2)及血红素加氧酶1(HO-1)表达情况及使用重组人促红细胞生成素(rhEPO)后的变化情况,进一步探讨rhEPO在急性脑缺血中的抗氧化作用机制。方法:采用随机法对动物进行分组:假手术组(n=12只)、模型组(n=12只)、rhEPO组(n=12只)。采用线栓法制备大鼠永久性局灶性脑梗死(pMCAO)模型,从颈总动脉分叉处计算,造模成功需要插入鱼线20mm左右长度,稍遇阻力后停止,将鱼线与颈总动脉结扎紧,假手术组插入鱼线约10mm,长度未及大脑中动脉。缺血2h时,rhEPO组腹腔注射rhEPO5000IU/kg,其余两组亦在缺血2h时给予等体积的生理盐水。缺血24h后,各组分别取6只大鼠在相应时间点深麻醉后,从心脏分别用37℃生理盐水、4%多聚甲醛灌注去血,为的是使组化背景清楚,不受血液干扰,待肝脏变白,灌注完成,立即断头取脑,于4℃冰箱内,中性甲醛固定24h后,取视交叉后1-4mm中段脑组织,石蜡包埋并切片,用于HE染色观察脑组织形态的变化情况及免疫组化法检测Nrf2与HO-1的表达;各组另外6只亦按相应时间点直接冰上断头取脑,不需去血,快速剥取左侧大脑皮层,锡箔纸包住后液氮速冻,再置于-80度冰箱,用于Western Blotting,测定Nrf2及HO-1的含量。结果:1、HE染色结果:假手术组脑组织结构正常,排列紧密,神经元与神经胶质细胞比例恰当,细胞形态正常,无水肿、空泡样结构。模型组有大片状液化灶形成,液化灶周围结构疏松,神经细胞核固缩,胞质呈深红色,胞体缩小变形,形态不规则。与模型组相比,rhEPO组亦有小片状坏死灶形成,但细胞水肿较轻,神经元坏死较少。2、免疫组化染色结果:假手术组有少量的HO-1阳性细胞,模型组和rhEPO组阳性表达细胞数较假手术组增多(P <0.05,P <0.05),且rhEPO组阳性细胞数多于模型组(P<0.05)。阳性表达主要为缺血区的神经元和星形胶质细胞的胞浆;假手术组有少量的Nrf2浆阳性细胞,模型组和rhEPO组有较多的Nrf2核阳性细胞,且rhEPO组较模型组明显增多,各组之间比较,均具有统计学意义(P <0.05)。3、Western Blotting结果:假手术组中,有少量的Nrf2及HO-1蛋白表达,维持细胞正常的生理功能,脑缺血发生后,在模型组中,胞浆内HO-1及核内Nrf2蛋白的量增加,使用rhEPO后,可以使核内Nrf2及胞浆内HO-1的表达量进一步增多,各组间两两比较,差异均具有统计学意义(P <0.05)。结论:1、急性脑缺血后,脑组织中的Nrf2、HO-1表达增高。2、rhEPO干预后,上调了Nrf2、HO-1的表达,rhEPO可能通过激活Keap1-Nrf2/ARE抗氧化系统而发挥脑保护作用。