背景前列腺癌(Prostate cancer,PCa)是男性最常见的恶性肿瘤之一,近年来以冷冻消融为主的微创与免疫治疗,是前列腺癌领域的前沿性研究之一。Th17和Treg细胞是肿瘤免疫微环境中重要的细胞群,参与免疫调节,Th17/Treg细胞及相关因子IL-17和TGF-β与肿瘤的发生、进展关系密切,深入探讨冷冻消融微创治疗对于免疫微环境的影响,及其与临床预后的相关性,以期为后续联合免疫治疗提供数据参考。目的探索外周血中Th17和Treg细胞及IL-17和TGF-β在前列腺癌发生发展的意义,以期为患者预后评估及冷冻消融治疗术后疗效分析提供线索。材料与方法收集2014年1月至2014年12月天津医科大学肿瘤医院介入科经冷冻消融治疗的30例前列腺癌患者的术前及术后7天、14天、21天的外周血标本,以及天津医科大学肿瘤医院就诊的20例前列腺增生患者和体检中心20例正常成年男性外周血标本,并记录临床资料,采用流式细胞术和ELISA的方法检测外周血中Th17细胞比例(Thl7%)和Treg细胞比例(Treg%)、二者比值及IL-17和TGF-β表达情况,观察三组人群各个指标的差异,分析其与临床因素及实验室指标的相关性;观察冷冻消融治疗前及治疗后7天、14天、21天,Th17和Treg细胞、二者比值及相关因子的变化;分析其表达情况与T3/T4期前列腺癌患者冷冻术后3月PSA缓解的相关性。结果1.Th17、Treg及Th17/Treg比例:与前列腺增生组及健康对照组比较,前列腺癌外周血中Th17细胞比例明显降低(2.09%vs.6.81%vs.6.71%,F=36.71,P<0.0001);但Treg细胞比例高于前列腺增生组与正常对照组(5.40%vs.2.56%vs.2.45%,F=23.88,P<0.0001);Th17/Treg比值低于前列腺增生组及正常对照组(0.43 vs.3.45 vs.3.51,F=29.68,P<0.0001)。2.细胞因子IL-17和TGF-β:与前列腺增生组及健康对照组比较,前列腺癌外周血中IL-17(ng/ml)水平明显降低(19.74 vs.28.39 vs.30.36,F=65.20,P<0.0001);但TGF-β(ng/ml)水平高于前列腺增生组与正常对照组(29.35 vs.13.86 vs.13.85,F=117.3,P<0.0001)。3.与临床因素的相关性:(1)年龄:前列腺癌<65岁组与前列腺癌≥65岁比较,Th17细胞比例(2.48%vs.1.83%,t=1.229,P>0.05);Treg细胞比例(5.16%vs.5.57%,t==0.6211,P>0.05);Th17/Treg比值(0.45 vs.0.42,t=0.3061,P>0.05);IL-17(ng/ml)水平(19.75 vs.19.74,t=0.0023,P>0.05);TGF-β(ng/ml)水平(2.48 vs.1.83,t=0.7900,P>0.05)。(2)T分期:前列腺癌T2/T3/T4期比较,Th17%(2.17%vs.2.30%vs.1.38%,F=0.5789,P=0.5673,P>0.05);Treg%(5.23%vs.5.15%vs.5.52%,F=0.1174,P=0.8897,P>0.05);Th17/Treg比值(0.48 vs.0.46 vs.0.27,F=0.6406,P=0.5354,P>0.05);IL-17(ng/ml)水平(22.43 vs.18.88 vs.18.27,F=33.68,P<0.0001),其中T2期与T3、T4期比较,有统计学差异(P<0.05);TGF-β(ng/ml)水平(17.61vs.24.21 vs.32.58,F=23.67,P<0.0001),其中T3期与T4期比较,有统计学差异(P<0.05)。(3)Gleason评分:前列腺癌Gleason评分2-6、7、8-10组比较,Th17%(3.43%vs.2.28%vs.1.68%,F=5.006,P<0.05),其中2-6分与8-10分组比较,有统计学差异(P<0.05);Treg%(4.3%vs.6.08%vs.6.42%,F=5.088,P<0.05),其中2-6分组与7分、8-10分组比较,有统计学差异(P<0.05);Th17/Treg比值(0.77 vs.0.37 vs.0.32,F=4.355,P<0.05),其中2-6分组与7分组、8-10分组比较,有统计学差异(P<0.05);IL-17(ng/ml)水平(20.55 vs.20.03 vs.19.38,F=0.7213,P>0.05);TGF-β(ng/ml)水平(24.56 vs.30.11 vs.30.69,F=2.549,P>0.05)。(4)盆腔淋巴结转移:转移组与无转移组比较,Th17%(2.21%vs.1.88%,t=0.5852,P>0.05);Treg%(6.02%vs.5.06%,t=0.5042,P>0.05);Th17/Treg比值(0.35 vs.0.55,t=1.726,P>0.05);IL-17(ng/ml)水平(19.10 vs.20.85,t=0.5852,P>0.05);TGF-β(ng/ml)水平(30.75 vs.26.93,t=1.693,P>0.05)。(5)骨转移:骨转移组与无骨转移组比较,Th17%(2.27%vs.1.67%,t=1.059,P>0.05);Treg%(5.51%vs.5.16%,t=0.5024,P>0.05);Th17/Treg比值(0.36vs.0.47,t=0.9230,P>0.05);IL-17(ng/ml)水平(19.38 vs.20.60,t=1.464,P>0.05);TGF-β(ng/ml)水平(30.72 vs.25.05,t=2.499,P<0.05)。(6)前列腺特异性抗原(PSA):前列腺癌<20ng/ml组与≥20ng/ml组比较,Th17%(2.32%vs.1.74%,t=0.8805,P>0.05);Treg%(5.06%vs.5.63%,t=0.8805,P>0.05);Th17/Treg比值(0.41 vs.0.33,t=1.188,P>0.05);IL-17(ng/ml)水平(20.68 vs.19.12,t=2.058,P<0.05);TGF-β(ng/ml)水平(25.48 vs.31.94,t=3.259,P<0.05)。(7)碱性磷酸酶(ALP):前列腺癌<150U/L组与≥150U/L组比较,Th17%(2.18%vs.2.02%,t=0.7849,P>0.05);Treg%(5.12%vs.5.62%,t=0.7849,P>0.05);Th17/Treg比值(0.32 vs.0.38,t=0.8412,P>0.05);IL-17(ng/ml)水平(20.53 vs.19.14,t=1.824,P>0.05);TGF-β(ng/ml)水平(26.17 vs.31.78,t=2.748,P<0.05)。4.冷冻消融的影响:冷冻消融术前、术后7天、14天、21天比较,Thl7%(2.09%vs.5.12%vs.6.55%vs.2.27%,F=8.038,P<0.0001);Treg%(5.40%vs.4.54%vs.1.70%vs.4.88%,F=33.66,P<0.0001);Th17/Treg比值(0.43 vs.1.33 vs.5.94 vs.0.53,F=13.45,P<0.0001);IL-l7(ng/ml)水平(19.74 vs.19.88 vs.28.42 vs.19.70,F=124.3,P<0.0001);TGF-β(ng/ml)水平(29.35 vs.26.31 vs.17.77 vs.31.52,F=39.3,P<0.0001),提示Th17%、IL-17及Th17/Treg比值在术后有所上升,第14天达到高峰,但随时间延长有降低趋势,而Treg%、TGF-β在术后有所降低,第14天降到最低点,但随时间延长有升高趋势。5.与临床预后的相关性:前列腺癌患者冷冻消融术后,PSA缓解组与PSA未缓解组比较,Th17%(2.21%vs.1.90%,t=0.5790,P=0.5172,P>0.05);Treg%(5.47%vs.5.31%,t=0.2394,P>0.05);Th17/Treg比值(0.44 vs.0.43,t=0.07910,P>0.05);IL-17(ng/ml)水平(20.11 vs.19.5,t=0.7538,P>0.05);TGF-β(ng/ml)水平(29.51 vs.29.11,t=0.1723,P>0.05);PSA下降>80%组与PSA下降50%-80%组比较,Th17%(2.38%vs.1.62%,t=2.295,P<0.05);Treg%(4.12%vs.5.74%,t=1.782,P>0.05);Th17/Treg比值(0.59 vs 0.32,t=2.715,P<0.05);IL-17(ng/ml)水平(21.65 vs.18.71,(21.65 vs.18.71,t=2.770,P<0.05);TGF-β(ng/ml)水平(28.00 vs.30.91,t=1.102,P>0.05)。结论1.相比与健康对照组及前列腺增生组,Th17%、IL-17及Th17/Treg比值在Pca患者外周血中低表达,Treg%、TGF-β在Pca患者外周血中高表达。在前列腺癌患者中,Th17%、IL-17及Th17/Treg比值与Gleason评分及临床分期负相关;其中IL-17还与盆腔淋巴结转移及PSA水平负相关,而TGF-β与Gleason评分、临床分期、骨转移及PSA、ALP水平正相关。2.冷冻消融治疗后Th17%、IL-17及Th17/Treg比值在第14天达到高峰,诱导机体抗肿瘤免疫向Th17优势转化,随时间延长有降低趋势;冷冻消融治疗后Treg%、TGF-β在第14天降到最低点,随时间延长有升高趋势。3.冷冻消融术后3月PSA缓解组与未缓解组比较,术前Th17%、Treg%、Th17/Treg比值、IL-17及TGF-β的表达,无统计学差异;但我们将PSA缓解组根据PSA下降幅度分为PSA下降>80%组和PSA下降50%-80%组两者比较,术前Th17%、Th17/Treg比值及IL-17的表达,前者高于后者,有统计学差异;而Treg%、TGF-β在PSA下降>80%组有低于PSA下降50%-80%组的趋势,但无统计学差异;提示我们可将术前Th17%、Treg%、Th17/Treg比值和相关因子IL-17、TGF-β用来预测冷冻消融治疗的疗效,可能具有临床指导意义。