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干扰素(interferon,IFN)是一类具有高活性的多功能糖蛋白,具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。牛α干扰素(BoIFN-α)是具有强抗病毒活性的细胞因子,对其进行系统研究具有重要意义。牛乳铁蛋白素(Bovine lactoferricin,LFcinB)是从牛乳铁蛋白N端区域分离的一段活性肽,抗菌实验证明其能抑制或杀死包括大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在内的多种革兰氏阳性菌及阴性菌。除具有抗菌活性外,乳铁蛋白素还具有抗寄生虫、抗肿瘤、抗真菌、抗病毒和免疫调节作用。 本研究以实验室制备并保存的含有BoIFN-α0和BoIFN-α2完整开放阅读框的重组质粒为模板,采用PCR的方法获得了BoIFN-α0/2的成熟肽基因。在酵母菌GS115中实现了重组蛋白BoIFN-α0/2的分泌表达,并对纯化的干扰素蛋白的理化性质及生物学活性做了相应研究。随后的研究中,选取牛乳铁蛋白素衍生物LFB(LFcinB15-W4,10)与抗病毒活性较高的BoIFN-α0进行串联,应用两种表达载体(pPICZαA和pGAPZαA)在酵母菌GS115中实现了蛋白表达。对获得的融合蛋白在VSV/MDBK系统上检测抗病毒活性,在MH肉汤中检测抗金黄色葡萄球菌ATCC25923的抑菌活性。 结果显示,BoIFN-α0和BoIFN-α2在MDBK细胞中的抗VSV活性分别为:5.71×106U/mg和1.36×106U/mg,抗IBRV活性分别为:7.31×104U/mg和3.78×104U/mg。理化性质分析表明BoIFN-α0/2对胰酶极敏感、对热不敏感、具有耐酸能力,是典型的IFN-α。融合蛋白BoIFN-α0-LFB(pPICZαA)、 BoIFN-α0-LFB(pGAPZαA)和LFB-BoIFN-α0(pGAPZαA)在VSV/MDBK系统上的抗病毒活性分别为:2.04×106U/mg、1.83×106U/mg和1.56×106U/mg,在MH肉汤培养基中均不具有抑制金黄色葡萄球菌ATCC25923生长的活性。 本研究结果与实验室其他研究人员的研究成果共同组成牛α干扰素家族的系统研究,同时从侧面证明牛乳铁蛋白素的靶点在细菌细胞内而非细菌的细胞膜。