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目的：分离培养兔骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells, BMSCs)。体外立体诱导骨髓间充质干细胞向成软骨方向分化,观察立体诱导过程中骨髓间充质干细胞中Sox9及11型胶原mRNA的含量随时间的表达关系,对组织工程化软骨进行基因水平上的初步研究。方法：新西兰大白兔3只。股骨粗隆处备皮,用骨髓穿刺针抽取骨髓,采用全骨髓贴壁培养生长法培养骨髓间充质干细胞,使之得到分离纯化。传代至第3代备用。MTT法测细胞增值率,描绘增殖曲线,观察细胞生长状态。取3代细胞,调整细胞数量为1.5×106/离心管,150g离心后分为实验组(立体成软骨诱导培养组)与对照组(立体非成软骨诱导培养组)。实验组采用含有lOng/mlrhTGF-p,的成软骨诱导液培养,对照组采用不含TGF-β1的诱导液进行培养。分别在第4天,8天,12天,16天提取总RNA,行RT-PCR,检测Sox9及Ⅱ型胶原mRNA表达。结果：全骨髓培养后骨髓间充质干细胞呈贴壁生长,随着换液骨髓中其他不贴壁生长的细胞逐渐被弃去,使得骨髓间充质干细胞得到进一步纯化。传代后细胞生长速度明显加快,并呈旋涡状生长。3代骨髓间充质干细胞生长良好,经历潜伏期、对数期、平台期。实验组细胞第2天形成小球,并逐渐长大。而对照组细胞无法形成小球,松散沉积于离心管底。RT-PCR检测实验组Sox9与Ⅱ型胶原表达含量均随时间逐渐升高,两者呈高度相关性。对照组Sox9表达随时间变化无明显统计学意义,Ⅱ型胶原表达未检出。结论：全骨髓贴壁生长法可使骨髓间充质干细胞得到分离纯化。含有TGF-β1的诱导培养液可使骨髓间充质干细胞立体诱导成软骨分化,而不含TGF-β1的诱导培养液无法诱导成软骨分化。成软骨分化中,Sox9与Ⅱ型胶原表达逐渐增高,且两者呈相关性。TGF-β1可以上调Sox9的表达量,由于Sox9是Ⅱ型胶原转录因子,表明在本实验中立体诱导过程是通过上调Sox9表达从而促使成软骨分化的。