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越桔属(Vaccinium)植物分布广泛,从热带一直到北极圈都有,在我国集中分布于西南几省。越桔(Vacciniaceae)是一种果药兼用的植物,含有大量对人类健康有益的物质,包括:抗氧化物,鞣酸,叶酸,抗菌成分,丰富的食用纤维等。越桔喜生于微酸性土壤中,有些为酸性土壤指示植物。我国土壤中酸性土面积大而种类多,酸性土总面积在2亿hm~2以上。除去砖红壤和赤红壤等不适宜发展的地区以外,适栽土壤区域不少于1亿hm~2。由于许多作物对酸性土壤的适应局限性,这些区域大多数在经济上比较贫困落后,开发的潜力相当大。 组织培养技术可以在短期内生产出大量的优质苗木,而试管苗成本高低是商品化育苗工厂的决定因素,降低试管苗成本是提高工厂化育苗经济效益的关键途径。而组培苗驯化成活率低,成活后移栽到田间生长势弱。越桔根系呈纤维状,没有根毛,但在自然状态下,越桔根系与菌根真菌共生形成杜鹃类菌根(Ericoid mycorrhiza.EM)。EM在促进植物生长、提高养分吸收率、生态系统养分循环及保护植物抵御不良环境胁迫中起关键作用。 本论文从越桔组织培养的应用研究出发,以兔眼越桔(Vaccinium ashei Reade)栽培品种园蓝(Garden blue)为主要试材,针对越桔在组织培养中使用的玉米素价格昂贵,用量大,组培苗驯化成活率低等问题。用价格比较低廉,分裂素活性比较强的TDZ宋代替ZT,对培养基进行了简化研究。并从缙云山上十年生以上的越桔属植物乌饭树(Vaccinium.sprengelii Sleumer)根系上分离菌根真菌,对越桔组培苗进行了接种,研究杜鹃类菌根(EM)对组培苗的生理效应。 一、影响兔眼越桔初代培养的因素研究 试验结果表明:在初代培养中,用0.1%的升汞消毒外植体6~8min最为适宜。兔眼越桔西南农业人学硕l学位论文摘要春季取材腋芽的诱导率都比秋季取材的高,而且诱导出的芽长势也较好。春秋季萌生出的根状装的萌芽率比钱尖和茎段的萌芽率高,诱导培养基改良wPM附加5.omg·L一’玉米素明显提高了芽的一秀导率,并且所诱导出的腋芽长势较强‘影响兔眼越桔继代培养的因素研究 在继代培养中,我们对影响增殖系数的基本培养基种类,激素种类及浓度,琼脂用量,蔗糖用量,pH值和继代周期进行了研究。结果表明:改良wpM培养基显著促进了越桔组培苗的增殖。激素是影响增殖的关键因子,我们以改良WPM培养基为基本培养基,对激素ZT、TDZ、GA3、6一BA同时进行了筛选,试验结果表明:TOZ对增殖系数的影响极显著优于ZT、GA;、‘BA,平均增殖系数可达到7。改良wPM培养基附加Tozo:mg·L-’+GA31.omg·L一,+I AAO.2 mg·L一’为增殖培养基的最优组合。不同的蔗糖处理对增殖系数的影响差异不显著,最优增殖培养基附加蔗糖209·u’的处理其平均增殖系数略大些,在生长中的表现也比较好。不同琼脂用量对增殖系数的影响也没有显著差异,但培养基中附加7g·t-l琼脂,组培苗的平均增殖系数最大。pH值对增殖系数的影响差异显著,其中以pH值5.5的处理影响最显著,这与越桔的喜酸特性是相吻合的。不同继代周期对增殖系数的影响差异极其显著,以4周为一个继代周期,其增殖系数最高,周期也比较短,转接时组培苗的生长势还比较强,若周期太长,培养基会板结开裂,成本也会升高。影响兔眼越桔叶片不定芽诱导率的因素研究 我们对无菌苗的叶片进行了诱导培养,以改良WPM为基本培养基,试验结果表明:暗处理对叶片不定芽的诱导率存在显著差异,其中暗处理20天叶片不定芽的诱导率最高。TDZ0.05mg’u’可诱导出大量的叶片不定芽,并且不经愈伤阶段,不定芽直接从叶片上分化出。四、兔眼越桔培养基简化的研究 分别用白砂糖、自来水、琼脂条代替蔗糖、蒸馏水、琼脂粉,对培养基进行了简化研究,试验结果表明:几种简化培养基对增殖系数的影啊差异不显著,其中以简化培养基改良wPM+白砂糖209·L一’+琼脂条8g·L一’+自来水效果最好。五:兔眼越桔组培苗的生根研究 由于木本植物组培苗生根比较困难,我们同时采用瓶内生根和瓶外生根两种方法,对越桔组培苗进行诱导生根,试验结果表明:1/2改良wPM+NAAO.5 mg·L一,的处理生根率最高,可达68.98%,遮光处理20天可明显提高组培苗的瓶内生根率,生根率可高达82、18%。激素速蘸处理以NAA 1 000 mg·L一’可使瓶外扦插苗生根,但生根率只有17.95%。生根苗基部基本没有愈伤出现,较瓶内生根苗的须根略粗,颜色嫩白,根数较多。西南农业人学硕l学位论文摘要六:杜鹃类菌根真菌对越桔组培苗的生理效应研究 我们对重庆络云山十年生以上的乌饭树根系上的新土根进行检测,并把含有菌丝体的土样接种到生根的越桔组培苗根部,研究杜鹃类菌根真菌EM对组培苗的生理效应。试验结果表明:EM在5月份对鸟饭树根系的佼染率最高,在炎热的7月和9月,侵染率比较低。接种EM明显提高了越桔组培苗的驯化成活率,驯化苗地上部和根系的N、P含量明显高于对照,其中N含量的提高尤为明显,K的含量提高不明显。接种EM后,越桔组培苗的蛋白质含量及糖含量均高