背景与目的：　　推断死亡时间(Postmortem Interval,PMI)指从机体死亡时刻至尸检时的间隔时间。许多非自然死亡案件发生的时间不清楚，所以准确地推断PMI，对于提供案件侦查线索、划定侦查范围、确定犯罪嫌疑人和案件性质，阐明作案过程及嫌犯审判等方面均有重要司法意义。确定PMI一直是法医实际鉴定工作中头等重要的问题，随着医学科学技术的快速发展，国内外法医工作者利用生物物理学、生物化学、免疫组织化学、分子生物学等方法和技术，进行了大量推断PMI的研究，但由于尸体受到自身自溶腐败和尸周各种环境因素的综合影响，迄今为止，仍无一种公认的准确可靠、简单易行的推断PMI方法。　　生物力学在临床医学及生命科学等各领域得到了很好应用和发展，其大多是利用活体或新鲜组织研究生物体的形态结构、生理功能与力学的关系。生物力学在法医学各种机械性损伤成伤机制的研究和各种损伤方式、致伤物推断等法医鉴定方面也有较多的报道和应用。但利用尸体组织生物力学性状时序性变化来推断PMI的研究报道较少。生物体各组织因具有不同的物质成分、空间结构及形态特点，决定了其特有的生物力学性状，组织结构不变时，力学性状不会发生变化，而组织结构的变化则必定导致生物力学性状的变化。根据物质构效关系法则推测，在不可逆的进行性尸体组织自溶腐败和风化等综合性因素作用下，组织的形态结构和组成成分均发生剧烈且持续性破坏，具有不同形态结构、不同成分及其构成比的各种尸体组织，必然发生相应的生物力学性状构效关系的时序性变化，存在各组织的最佳“窗口期”及其组合，利用敏感的生物力学性状检测指标，可在其相关性最佳的“窗口期”内准确量化地推断PMI。　　本实验应用生物力学理论和技术，探讨了尸体肝组织生物力学性状时序性变化规律与PMI的关系。综合肝组织大体形态、显微组织结构、扫描电镜超微结构观察，结合计算机图像处理技术，量化分析肝组织生物力学性状与其形态结构的构效关系，及其与PMI的相关性，结合生物力学和量化病理学用于PMI的推断，为法医学推断PMI提供一种新的检测方法。　　材料与方法：　　深圳市公安局技术处法医检验中心2011年3月～7月明确PMI不同死因男性尸体36例，18～40周岁，除2例外，均-5℃±3℃冰柜冷冻数小时～数月，室温解冻后，常规尸检取肝，室温保湿存放，按即时、12h、24h、36h、48h、60h、72h、84h、96h、108h、120h、132h、144h、156h及168h时间点分组取材。另成年家猪10头，体重150±20kg，常规屠宰取肝，25℃湿度70％±5%恒温恒湿保存，分组时间点增加18h和30h，余同上。　　定位人肝右叶膈面前中部向深部切取肝组织，大小1.5×1×1cm3长方体，每组3-5个试件，4%甲醛液1:10固定72h；猪肝左外、左内、右内、右外四叶最厚部位，余同上。　　采用便携式生物力学检测仪(KDI-0.2)，纵向压缩肝组织试件，检测：力-变形曲线、应力-应变曲线、极限载荷、断裂力、极限应力、极限应变、弹性模量、屈服应力、屈服应变、25%压缩载荷及最大吸收能量等指标。同时，观察试件大体形态变化，取部分试件备制常规切片HE染色、胶原纤维染色和网状纤维染色、扫描电镜组织形态学观察，计算机图像处理量化分析肝组织及其胶原、网状纤维的面积、光密度、胶原纤维空隙面积等指标。　　SPSS16.0统计软件进行单向方差分析(One-way ANONA)及独立样本t检验分析实验数据，结合死亡原因、环境温度、冰冻等因素，探讨肝生物力学性状与组织形态结构的构效关系，及其时序性变化与PMI相关性。　　结果：　　大体形态改变　　1、人肝组织大体形态，失血性休克死者肝淡红色，含血含液少；颅脑损伤等死者肝暗红色，含血含液多。总体上，即时～12h光泽，弹性好，质实，无臭味；24h～36h略混浊，软化有形，渗液多，少量腐败液气泡及臭味；48h～60h组织肿胀，软化变形，臭味大，泡沫器官形成；72h～84h无光泽，瘫软，臭味大，泡沫器官；96h～108h污秽，腐败液外溢，臭味大，泡沫器官；120h后混浊，腐败液多、臭味减小，泡沫器官。　　2、猪肝组织大体形态，即时～12h暗棕红色，光泽，弹性好，质实，无臭味，无渗出；12h～18h渗液，色泽度降低；24h～30h渗液多，瘫软，臭味；36h～60h腐败肿胀，臭味大，泡沫器官形成；72h～84h臭味大，泡沫器官，部分出现蝇卵；96h～108h臭味大，泡沫器官，部分蝇蛆；120h后臭味减小，泡沫器官，部分蝇蛆。　　肝组织生物力学性状　　1、人肝组织生物力学性状。36例即时-72h之间均呈明显下降趋势，与PMI相关性明显，极限载荷 R2=0.9734、极限应力 R2=0.9648、25%压缩载荷 R2=0.9485、最大吸收能量R2=0.9744。12例失血性休克死者肝即时组各项生物力学性状与PMI呈一定相关性，极限载荷R2=0.757，极限应力R2=0.7514；而25%压缩载荷和最大吸收能量与PMI的相关性较差，分别为R2=0.5499，R2=0.6776。经医疗救治的肝组织各项生物力学性状与PMI无相关性。　　2、家猪肝组织生物力学性状。10例猪肝组织各项生物力学性状随PMI均呈下降趋势，在即时-PMI60h，极限载荷及极限应力与PMI相关性最好，R2=0.9308及R2=0.9334，0h-24h-30h-36h-60h之间比较P＜0.05；25%压缩载荷与PMI相关性R2=0.8996，0h-18h-30h-60h之间比较P＜0.05；最大吸收能量与PMI相关性R2=0.9278，0h-18h-24h-30h-36h-60h之间比较P＜0.05，推断PMI精确度达6h。　　人和猪肝的断裂力、极限应变、弹性模量、屈服应力和屈服应变等变化均与PMI无相关性。　　肝组织形态学变化及其显微图像量化分析　　1、人肝组织　　⑴不同死因和室温的差别较大。即时～12h肝索排列规则，细胞浆强嗜酸性，核浆清晰；24h～36h肝索排列拥挤，细胞稍肿大，边界略模糊；48h～60h肝索排列紊乱，细胞肿大，核模糊；72h以上肝索解离，松散，部分细胞溶解。　　⑵肝细胞累积光密度(IOD)随PMI呈先升后降的抛物线变化趋势，但受死因影响较大：①失血性休克死者的肝细胞IOD与PMI相关性R2=0.765，各组间比较P＜0.05，推断PMI精确度达24h；②颅脑损伤死者的肝细胞IOD与PMI相关性R2=0.8729，各组间比较P＜0.05，推断PMI精确度达12h。但人肝细胞平均面积和总面积均没有明显规律性。　　⑶肝组织胶原纤维总面积和胶原纤维IOD随PMI呈上升趋势，而非胶原纤维总面积呈下降趋势，分别呈明显的正负相关性。但受死因影响较大：①失血性休克死者肝胶原纤维总面积、胶原纤维IOD及非胶原纤维总面积与PMI相关性分别为R2=0.9387、R2=0.8564、R2=0.9353，各组间比较P＜0.05，推断 PMI精确度达36h；②颅脑损伤死者三项指标与PMI相关性分别为R2=0.8922、R2=0.8539、R2=0.8424，各组间比较P＜0.05，推断PMI精确度达24h。　　2、家猪肝组织　　⑴肝组织形态观察，即时～12h肝索排列规则，细胞边界清晰；12h～18h肝索排列稍紊乱，细胞边界略模糊；24h～30h肝索排列紊乱，细胞肿大，核模糊；36h～60h肝索解离，松散，核消失；72h以上肝细胞松散、部分细胞溶解。但猪肝细胞IOD、平均面积和总面积随PMI呈无规律变化，无相关性。　　⑵肝组织胶原纤维总面积和胶原纤维IOD随PMI呈上升趋势，而非胶原纤维的总面积呈下降趋势，分别呈明显的正负相关性，三者分别为R2=0.773、R2=0.7522、R2=0.7287，各组间比较P＜0.05，推断PMI精确度达36h。　　⑶相同时间点的不同极限载荷比较：①即时组肝细胞IOD、胶原纤维总面积及胶原纤维IOD均无统计学差异（P＞0.05）；②PMI48h组肝细胞IOD无统计学差异（P＞0.05），但胶原纤维总面积及胶原纤维IOD均呈显著性差异（P＜0.05）。　　⑷扫描电镜观察，肝胶原纤维空隙平均面积随 PMI呈下降趋势，呈负相关性R2=0.8774，各组间比较P＜0.05，推断PMI精确度达12h。　　人和猪肝组织非胶原纤维IOD、胶原纤维平均面积、平均光密度及网状纤维面积、光密度等变化均无明显规律性，与PMI无相关性。　　结论：　　1、肝组织生物力学性状随PMI延长呈时序性下降趋势，与PMI之间呈明显的量化相关性，其中最大吸收能量、极限载荷、极限应力和25%压缩载荷的精确度达6h，提示检测尸体组织生物力学性状可作为一种客观量化、准确简便的推断PMI技术手段。　　2、死亡原因、环境温度、冰冻等均可影响尸体组织生物力学性状，需进一步积累案例及其相关因素数据，建立多因素推断PMI数理模型公式。　　3、尸体组织形态时序性变化与PMI呈一定相关性，随PMI延长不同组织成分对生物力学性状的作用力不同，构成组织生物力学性状的物质形态基础，呈明显的构-效关系。但是，形态学指标精确度明显低于生物力学性状指标。组织形态学及其生物力学性状指标变化均存在明显的种属差异性。　　4、甲醛液固定组织可保持取材时间点的组织结构、强化生物力学性状，便于检测和准确推断PMI。