难愈性创伤平时多见于糖尿病合并溃疡，术后病人放射治疗，核事故引起的放射损伤合并烧伤和/或爆炸伤，也多见于战时核爆炸以及贫铀武器引起的创伤合并放射损伤。难愈性创伤既有局部损伤，并多合并全身性损害，两者相互影响，给救治带来极大困难。目前对创伤愈合的促愈措施主要有药物促愈、新型敷料和传统敷料敷盖、皮肤移植疗法、细胞膜片疗法、细胞因子疗法和基因疗法。药物促愈、新型敷料和传统敷料敷盖仅能在一定程度上促进组织修复；细胞膜片疗法太薄易磨损和破溃；细胞因子疗法存在半衰期短的问题，促愈速率仅增加10%左右；基因疗法虽然克服了半衰期短的问题，但其基因转染表达的可调控性难以解决。采用组织工程(tissue engineering, TE)技术构建皮肤组织替代物虽是解决这一重要研究课题的最有效途径，但无论同体或异体皮移植均受到供体来源的限制，异体皮和人工合成皮肤代用品的移植还受到发生免疫排斥反应的困扰。本研究所对难愈性创伤（放射损伤合并创伤、合并烧伤）的难愈机理进行了较深入研究，提出了难愈性创伤是“以细胞损害为主的诸因素网络调节失控”假说，认为在创伤局部植入健康修复细胞，可能是促愈的有效措施。故创新性地将自体的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)体外培养扩增后，直接移植到放射损伤创面，获得良好的促愈效果，通过移植细胞示踪观察发现，移植细胞虽在植入后28天仍见到示踪细胞，但早期呈巢状分布，极不均匀，以胶原增生修复为主，表皮细胞覆盖较慢。我们设想，选择适当的生物材料负载移植细胞，使植入细胞分布相对均匀，同时加入具增殖能力的表皮细胞，加快创面上皮覆盖，尽可能实现完全性再生修复。因此，本实验在以往研究的基础上，选用具有独特结构-无血管基质及厚的基底膜的天然高分子生物材料-人羊膜（human amniotic membrane, HAM）作为负载材料，选用MSCs、表皮细胞作组织工程的种子细胞，将经处理的HAM分别负载经体外培养扩增的自体骨髓MSCs、表皮细胞，观察了HAM对骨髓MSCs和表皮细胞生长行<WP=8>为的影响；并将分别负载骨髓MSCs、表皮细胞的HAM共同移植于放创复合伤难愈性创面，观察了其对该创面的促愈作用，其主要结果如下：一、HAM对骨髓MSCs和表皮细胞生长行为的影响1.HAM经低浓度的氨水处理去除其细胞成分，仍为膜片状，有韧性，种植的细胞易于生长，植入创面后可被吸收，故HAM是负载细胞理想的生物材料。2．MSCs、表皮细胞种植于HAM基质上，细胞粘附快、增殖能力强，其最佳种植密度为1.54×105个细胞/cm2 。MSCs于种植12 h后全部粘附于HAM基质上，24 h后全部覆盖HAM基质面；表皮细胞于种植24 h后全部粘附于HAM上，3 d后全部覆盖HAM基质面，长势良好。3.示踪显示，生长在HAM基质上的细胞呈单层排列生长，电镜下生长细胞超微结构正常，胞浆内细胞器少，胞质膜伸出长短不一的“伪足”插入HAM基质内，与HAM紧密粘附生长，HAM能促进负载的细胞增殖。二、HAM负载骨髓MSCs、表皮细胞对难愈性创面的促愈作用1.将单纯处理的HAM及HAM负载MSCs或表皮细胞，植入20Gy局部照射合并皮肤全层及皮下深度创伤的创面，在23 d观察期内，创面未发生急性排斥反应及严重感染，这为处理HAM负载修复细胞促愈奠定了基础。2.HAM负载细胞植入与创床粘合良好，所负载的MSCs均匀分布于新生肉芽组织内，所负载的表皮细胞则分布于新生上皮层内。支撑细胞的两层HAM融合，起到细胞生长引导作用，之后渐被吸收。3. HAM负载细胞植入后，创面组织反应血管内皮细胞增殖的vWF蛋白表达增强，成纤维细胞、胶原合成增加，这两种肉芽组织的主要成分表达增强，有利于创伤愈合。同时，创沿表皮移行加速，有利于创面上皮化覆盖，可防止创面过渡纤维化修复。4.对比分析，单纯油纱敷盖组于伤后22～23 d愈合，单纯HAM敷盖组于伤后19～21 d愈合，HAM负载的MSCs和表皮细胞治疗组于伤后15～17 d 愈合，较单纯纱布敷盖组提前6～7 d愈合，较单纯HAM敷盖组提前5～6 d愈合。表明HAM负载两种修复细胞植入对难愈性创伤有较好促愈作用，尤其是愈合质量较高。