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二氧化氯的杀菌能力是次氯酸类的3-5倍,杀菌谱广,而且不会形成有机氯而影响人的健康,因此联合国卫生组织把二氧化氯定为A1级即最安全卫生的消毒产品,但二氧化氯目前最大的问题是稳定性差、使用前需要活化等。国内的稳定性二氧化氯消毒剂中的二氧化氯以亚氯酸盐的形式存在,经用活化剂活化后,才能释放出含有次氯酸钠的具有杀菌作用的二氧化氯气体,而且活化反应后生成的二氧化氯含量不稳定,完全不可控,杀菌能力与纯二氧化氯消毒剂溶液有较大的差距。本研究对传统二氧化氯溶液的制备方法进行了改良,通过采用一步化学反应法建立不需要活化的、安全性更高的纯净态稳定型二氧化氯溶液制备体系;并进行消毒效能评价,通过研究其对细菌、芽孢、病毒的杀灭效果确定最低有效浓度,以及对影响其消毒效果的因素等研究,确定了制备的纯净态二氧化氯溶液的消毒效能,为研发安全、高效的新型二氧化氯消毒剂提供依据。具体内容如下:1纯净态ClO2溶液的制备及检测方法的建立为制备纯净态ClO2溶液,以及建立一种操作简便、专一性强的检测方法对ClO2溶液含量测定。本试验以亚硫酸钠溶液与氯酸钠溶液在无机酸的作用下生成ClO2气体,将气体通入无氯超纯水进行吸收,制得纯净ClO2溶液。通过对不同浓度的标准ClO2溶液进行紫外吸收扫描,并进行定性、定量检测,建立标准曲线;同时考察了常见杂质离子ClO2-、ClO3-、ClO-、Cl-对含量测定的影响、并与传统五步碘量法进行含量测定的准确度对比。结果显示:ClO2在359 nm波长处有特征吸收峰,且各杂质离子均不影响在359nm处对ClO2溶液的定性、定量检测,相较于传统五步碘量法,紫外分光光度法检测结果更加准确。以紫外分光光度法对自制ClO2溶液含量测定结果显示ClO2浓度为135 mg·L-1。2 纯净态ClO2溶法中和剂筛选试验为确定C1O2溶液在消毒试验中合适的中和剂及使用浓度。参考《兽用消毒技术规范》中推荐的硫代硫酸钠作为中和剂。设定中和比为ClO2溶液:硫代硫酸钠溶液=1:9,中和作用时间设为10 min;设定中和剂浓度为:0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、1.0%,通过检测中和剂与ClO2溶液中和前后吸光度值的检测对比,确立最适中和剂浓度;试验中以大肠杆菌8099为试验菌株,用于中和实验的ClO2溶液浓度为135 mg·L-1,通过悬液定量方式检测硫代硫酸钠溶液作为中和剂是否对ClO2溶液杀菌效果产生影响。试验结果表明:0.5%硫代硫酸钠在不影响Cl02溶液吸光度值及杀菌消毒效果的情况下在10 min内能完全中和溶液中ClO2。3纯净态ClO2溶液杀灭微生物试验为考察ClO2溶液对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及芽孢的杀菌效能。选择标准株大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌6538、蜡样芽孢杆菌8008为试验菌,预试验选择浓度为6 mg·L-1、3 mg· L-1、1.5 mg·L-1的ClO2溶液作用于大肠杆菌8099、金葡菌653830s、1、2、3、4、5 min进行定性、定量杀灭试验,并以平板菌落计数法测定平均杀灭率及杀灭指数;以预试验结果为基础,正式试验中考察浓度为1.5 mg·L-1、0.75 mg·L-1、0.375 mg·L-1的ClO2溶液作用于大肠杆菌8099、金葡菌6538、蜡样芽孢杆菌8008 5、10、15、30、60 min进行定性、定量杀菌效能评价,并计算平均杀灭率及杀灭指数。结果显示:0.75 mg·L-1溶液作用于含菌量为2.2× 108 cfu·mL-1大肠杆菌菌悬液5min平均杀灭率可达99.99%;作用于含菌量为6.7× 107 cfu·mL-1金黄色葡萄球菌菌悬液10min时平均杀灭率为99.9%;作用于含芽孢量为1.6× 107 cfc·mL-1的蜡样芽孢杆菌菌悬液60 min杀菌率均达99.9%以上。4纯净态ClO2溶液对杀灭病毒试验为考察ClO2溶液的消毒效能,选择鸡新城疫病毒La Sota株及猪瘟兔化弱毒株为试验病毒。以ClO2溶液杀灭细菌、芽孢试验结果为参考,选择浓度为1.5 mg·L-1、0.75 mg· L-1、0.375 mg·L-1的ClO2溶液进行NDV和猪瘟病毒的定性、定量杀灭试验。定量杀灭试验:分别取各浓度ClO2溶液与NDV反应,后接种鸡胚尿囊腔通过观察120 h内鸡胚的存活情况计算其EID50并对死亡鸡胚进行血凝效价（HA）测定;定性试验:分别取各浓度ClO2溶液与NDV反应,于5、10、15、30、60 min吸取混合液0.5 mL加入4.5 mL中和剂中,取混合液0.1 mL鸡胚尿囊腔注射,统计120 h鸡胚存活情况测定EID50,并对死亡鸡胚进行HA测定。分别取1.5 mg·L-1、0.75 mg· L-1、0.375 mg·L-1的ClO2溶液与猪瘟病毒相互作用,将反应混合液以耳缘静脉注射的方式给到家兔体内,在给药后7 d内通过测定直肠体温对Cl02溶液杀灭猪瘟病毒效能进行评价。结果显示:1.5 mg·L-1、0.75 mg·L-1两个剂量组对NDV作用5 min后的杀灭率均达到了99.99%,但定性试验结果显示不能达到100%杀灭作用。同时对猪瘟兔化弱毒杀灭结果显示0.375 mg·L-1 ClO2溶液在20℃水浴中作用5 min可杀死全部病毒。该实验表明0.75 mg· L-1 ClO2溶液对两种病毒都有很好的杀灭效果。5 纯净态ClO2溶液消毒效果的影响因素试验为考察浓度、消毒作用时间、消毒时的温度、有机物浓度、pH值等因素对ClO2溶液杀菌消毒效果的影响。参考《兽用消毒技术规范》,选择大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌6538、蜡样芽孢杆菌8008作为试验菌。通过对0.75 mg·L-1、0.66 mg.L-1、0.56 mg·L-1 四个浓度在 5、10、15、30、60 min内分别对1×107～5×107 cfu·mL-1菌悬液的杀灭指数和平均杀灭率进行统计,以测定浓度及消毒作用时间对ClO2溶液杀菌消毒效果的影响;分别设定水浴锅温度为:10℃±1℃、20℃±1℃、30℃±1℃,将四支浓度为1×107～5×107cfu·mL-1菌悬液与0.75 mg· L-1 C1O2溶液的混合液分别置于不同温度下反应,于反应后测定杀灭指数和平均杀灭率考察温度对ClO2溶液杀菌消毒效果的影响;配制浓度分别为5%、10%、20%胎牛血清作为有机干扰物加入浓度为1×107～5×107 cfu·mL-1菌悬液与0.75 mg·L-1 ClO2溶液的混合液中,在反应后测定杀灭指数和平均杀灭率评价有机物浓度对ClO2溶液杀菌消毒效果的影响;配制pH值为2.0、4.0、6.0、8.0、10.0的ClO2溶液与浓度为1×107～5 ×107 cfu·mL-1的菌悬液进行反应,反应后通过测定平均杀灭指数和杀灭率考察溶液pH值对ClO2溶液杀菌消毒效果的影响。试验结果显示,ClO2溶液的杀菌消毒效果随着ClO2溶液浓度的升高、作用时间的延长、在10℃～30℃内温度的升高而加强,5%以上浓度的胎牛血清可降低其杀菌效能,在pH<10的范围内Cl02溶液酸碱度的变动对其杀菌效能影响较小。