大鼠骨髓间充质干细胞培养及体外诱导向神经元样细胞分化的研究

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ziyi1965
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目的:建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外培养体系,诱导分化为神经元样细胞,筛选较好的体外诱导方法,为下一步内耳移植实验提供前期研究基础。方法:LBMSCs培养:主要采用全骨髓直接贴壁法培养BMSCs并传代,取P3代行流式细胞仪检测BMSCs表面标志CD29, CD90及造血细胞表面抗原CD45的表达。2.取P4代BMSCs,由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后,分别加入:A组诱导剂:神经营养素3(NT-3),维甲酸(RA);B组诱导剂:p-硫基乙醇(BME)。诱导lh,5h,24h,7d,14d,21d后,采用细胞免疫荧光方法鉴定,检测成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况,观察两组是否有染色阳性的神经元样细胞及比较阳性率的高低。结果:1.全骨髓贴壁筛选法简便,所获得的细胞数量多,增殖分化快。2.流式细胞仪检测BMSCs表达CD90、CD29;不表达CD45,结合细胞形态分析,符合BMSCs的特征。3.细胞免疫荧光结果示NSE阳性表达,A组诱导分化为神经元样细胞的阳性率明显高于B组。结论:1.全骨髓贴壁筛选法分离培养的BMSCs所获得的细胞数量多,增殖分化快,纯度高。2.采取分步诱导和联合诱导BMSCs,由bFGF预诱导24h后,换用NT-3+RA诱导分化为神经元样细胞NSE阳性率明显高于BME诱导,是一种比较好的诱导方案。
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