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目的:肥胖是目前人类健康所面临的最大挑战之一,其核心病理生理过程是能量摄入与消耗之间的不平衡,导致过剩的能量以脂肪形式在体内堆积。脂肪细胞数量增多和体积增大是机体脂肪组织增加的根本途径,因而受到了研究者广泛的关注。肌肉生长抑素(myostatin, MSTN)因其对骨骼肌生长的强烈负性调节作用于1997年被发现,此后又发现其与脂代谢亦存在密切关系:多项体内实验提示MSTN功能缺失具有抗脂肪形成的作用:体外细胞水平的研究则提示,MSTN抑制前脂肪细胞的分化,使其脂质累积减少,但对前脂肪细胞的增殖有无影响,对前脂肪细胞分化的可能的作用靶点是什么?目前国内外尚无相关报道。所以本研究旨在探讨MSTN对小鼠前脂肪细胞3T3-L1增殖及分化的影响,并寻找可能的作用靶点。方法:1. MSTN对小鼠前脂肪细胞3T3-L1增殖的影响:以AIMV无血清培养基培养3T3-L1细胞,使其自然增殖,于增殖第3天起以不同浓度(0~6.4nM)MSTN作用于增殖中的3T3-L1细胞,之后每24小时以MTT法观察细胞增殖情况;2. MSTN对小鼠前脂肪细胞3T3-L1分化的影响:2.1.采用含胰岛素、地塞米松与IBMX的分化培养基诱导分化3T3-L1细胞,于诱导分化第8天起以不同浓度(0~20nM)MSTN作用于分化中的3T3-L1细胞,此后每3天以油红O染色并染料提取的半定量方法及细胞内甘油三酯测定的方法了解细胞内脂质含量,从而观察MSTN对3T3-L1细胞分化的影响。2.2.3T3-L1细胞诱导分化8天后加入不同浓度(0及20nM)MSTN,作用3天后收集细胞提取总RNA并逆转录为cDNA,采用实时荧光定量RT-PCR的方法对维持分化相关转录因子(PPARγ及CEBPα)、脂代谢关键酶(LPL、ACC1、ACS1、FAS、GPDH、DGAT、HSL、ATGL及CPT1)及脂肪因子(leptin、 adiponectin、resistin、visfatin及PAI-1)mRNA表达水平进行检测,寻找MSTN影响3T3-L1细胞分化的可能作用靶点。结果:1. MSTN对小鼠前脂肪细胞3T3-L1增殖的影响:1.1.0.025nMMSTN抑制3T3-L1细胞的增殖,持续作用至24小时该作用达到峰值(OD值为对照组89.6±8.3%,p<0.01),抑制作用随持续作用时间的延长而减弱,至96小时该作用消失(OD值为对照组101.7±8.8%,p=1.00)。1.2.0.2-6.4nM MSTN促进3T3-L1细胞的增殖,该作用具有剂量及时间依赖性,最大促进作用可于3.2nM达到(96小时OD值为对照组187.0±14.7%,p<0.01),进一步提高MSTN浓度不能使其刺激增殖的效应继续放大(6.4nMMSTN在96小时OD值为对照组188.0±16.1%,p<0.01;但与3.2nMMSTN组相比,两组的差异无统计学意义,p=1.00)。2.MSTN对小鼠前脂肪细胞3T3-L1分化的影响:2.1.油红O染色半定量法及甘油三脂测定法均提示MSTN对3T3-L1细胞的分化具有抑制作用,该抑制作用随MSTN持续作用时间的延长而增强。至MSTN持续作用第6天,油红O染色半定量法测定5nM MSTN组OD值为对照组59.8±11.6%,p<0.01;甘油三酯测定法5nnM及10nM MSTN组甘油三酯含量分别为对照组90.6±4.9%及70.4±6.8%, p<0.01。2.2.3T3-L1细胞诱导分化8天,以10nM的MSTN作用3天后,与未加药组相比,维持分化的转录因子PPARy及CEBPa mRNA相对表达量显著降低(分别为对照组60.2±5.8%,p<0.01及78.3±18.4%,p<0.05):脂肪合成关键酶LPLACS1、GPDH及DGAT mRNA相对表达量显著降低(分别为对照组52.4±9.4%、75.7±12.0%、56.9±2.4%及58.2±11.6%p<0.01),而ACC1及FASmRNA相对表达量轻度下降但结果不具有统计学意义(分别为对照组93.8±15.6%p=0.589及92.2±16.0%p=0.449):脂肪分解关键酶HSL及ATGL mRNA相对表达量显著降低(分为对照组75.8±7.4%及43.1±8.3%,p<0.01)而CPT1mRNA相对表达量显著升高(为对照组117.2±9.7%,p<0.01);脂肪因子leptinmRNA相对表达量无明显变化(为对照组117.2±9.7%,p<0.01),adiponectin、resistin、visfatin mRNA相对表达量显著降低(分别为对照组60.8±6.0%、29.6±1.6%及47.7±2.5%,p<0.01)而PAI-1mRNA相对表达量极显著升高(为对照组986.8±116.7%,p<0.01)。结论:1.肌肉生长抑素对小鼠前脂肪细胞3T3-L1增殖的影响:肌肉生长抑素在低浓度时轻度抑制3T3-L1细胞的增殖,在高浓度时显著促进3T3-L1细胞的增殖。2.肌肉生长抑素对小鼠前脂肪细胞3T3-L1分化的影响:肌肉生长抑素抑制3T3-L1细胞的分化,这一作用可能是通过抑制PPARγ的转录实现的;肌肉生长抑素抑制3T3-L1细胞内累积脂滴,这一作用可能是通过抑制脂肪合成相关酶并促进部分脂肪分解相关酶的转录实现的;肌肉生长抑素不同程度地影响脂肪因子的转录。