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细胞分化与去分化是生命科学领域中的一个研究热点,对其机制的研究为肿瘤的发生及防治提供重要依据。哺乳类红系细胞的分化具有明显的时序性变化,当细胞进入终末分化时出现:停止分裂、细胞体积逐渐减小、细胞核固缩、排核和特异蛋白-血红蛋白的表达等变化。小鼠胎肝是小鼠早期的主要造血器官,红系细胞在胎肝E10.5~E17.5造血过程中发生并完成终末造血过程,已成为研究体内红系分化的良好模型。此外,现已证实多种诱导剂能诱导红白血病细胞重新进入分化阶段,表达血红蛋白,这也是红系分化与癌变的另一个模型。在本实验室的前期工作中,利用差异蛋白质组学技术鉴定出丁酸钠诱导小鼠红白血病(Murine eryt hroleukemia,MEL)细胞向红系细胞分化过程和小鼠胎肝造血过程中有许多差异表达的蛋白质。其中既有一些已经有一定功能研究基础的蛋白质,例如:NPM1、P irin、RbAp48、NonO等;也有一些功能和高级结构未知的蛋白质,例如:PBDC1、UPF0538等。本文用细胞与分子生物学技术和方法研究PBDC1和NonO蛋白在红系分化过程中的功能,以及UPF0538蛋白的抗体制备。结果表明PBDC 1在MEL细胞和小鼠胎肝细胞中主要定位于细胞质,也有少量定位于细胞核。GS T沉降实验鉴定出159个PBDC1的潜在相互作用蛋白,其中有很大一部分肽酶和氧化还原酶,还有一些GTP结合蛋白、电子转移蛋白、铁离子结合蛋白,猜测PBDC1可能参与细胞内的氧化还原反应,电子转移,铁离子结合等过程,但需后续实验验证。此前,我们发现在SB诱导MEL分化过程中,NonO蛋白表达呈上调趋势,并且与红系负调控因子PU.1共定位,这说明NonO可能参与红系分化的调控。本文中为进一步研究NonO蛋白在MEL细胞分化中的作用,通过shRNA干扰方式构建了低表达NonO稳定细胞株。MTT比色法结果表明,NonO的低表达会抑制MEL细胞的增殖活力。Western blot鉴定结果表明低表达NonO蛋白会引起c-myc蛋白表达下调,而c-myc在调控红系分化方面有重要作用。由此可推测,NonO通过c-myc和P U.1调控红系分化过程。UPF0538是一个功能和高级结构未知的蛋白质,目前还没有商品化的抗体。为研究UPF0538在分化过程中的功能,我们利用原核表达系统获得大量的UPF0538融合蛋白,并以此免疫新西兰大白兔,制备了其多克隆抗体,为研究UPF0538的功能提供了基础。