真菌性角膜炎的改良玻片培养法的菌种鉴定及Etest法的药物敏感性测定

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目的:建立改良玻片培养法对真菌性角膜炎的分离菌株进行菌种的鉴定和分布分析,检测临床分离菌株的药物敏感性。资料与方法:对2002年9月至2006年3月期间就诊于浙江大学医学院附属邵逸夫医院、临床诊断为真菌性角膜炎的216例患者进行病原学检查。临床诊断主要依据病史及角膜化脓性浸润病灶的特征表现。培养标本取自212例临床诊断为真菌性角膜炎并且未发生角膜穿孔病例的角膜刮取物;另外4例患者初诊时角膜己穿孔,因此初诊时未进行病原培养,但对进行治疗性角膜移植术(therapeutic penetrating keratoplasty,T-PKP)后取下的受体角膜材料进行进一步的病原培养。标本直接接种到血、巧克力、Sabouraud右旋糖(Sabouraud dextrose agar,SDA)和伊红美兰四个琼脂培养基上,置适宜温度下培养。培养阳性的判断标准为:2个或2个以上的培养皿在原接种区域生长同一色泽及形态的菌落。观察并拍照记录各培养菌落的形态、色泽及生长情况。再采用我们建立的一种改良玻片培养法对分离菌株进行菌种鉴定,方法如下:将在SDA培养基上生长良好菌落的1/4转接种至另一SDA培养基上,以接种点为直角顶点放置20×20mm的消毒盖玻片,室温下培养2~4天,当菌丝沿着盖玻片的两边向玻片内生长到一定程度时,将玻片小心取出翻转后贴在滴有乳酸酚棉蓝染液的载玻片上,用25×50mm盖玻
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