【摘 要】
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抗体工程是当前研究的焦点之一,而运用抗体工程技术构建通用载体系统也是研究者们所关注的技术平台.该课题从抗体工程的角度出发,在毕赤酵母中构建了一个重组抗体表达系统;该
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抗体工程是当前研究的焦点之一,而运用抗体工程技术构建通用载体系统也是研究者们所关注的技术平台.该课题从抗体工程的角度出发,在毕赤酵母中构建了一个重组抗体表达系统;该系统通过表达抗GST(谷胱甘肽-S-转移酶)的重组抗体进行了验证.构建了毕赤酵母表达系统pPIC9-Fc.此载体系统含有小鼠抗体IgGl的Fc段(铰链区,C<,H>2和C<,H>3段),His<,(6)>-tag和适当的酶切位点Sfi Ⅰ和Not Ⅰ.此系统可直接插入从噬菌体抗体库(pCANTAB和pHEN)中筛选所得的单链抗体(ScFv)片段,并以重组抗体分子——ScFv-Fc融合蛋白的形式获得高效表达.His<,(6)>-tag的加入可直接用于纯化.抗GST的重组抗体ScFv-Fc在此系统中获得了表达,验证了此载体系统的有效性.该重组抗体在毕赤酵母中获得了高效表达,产量达10-30毫克/升.此重组抗体保留了结合GST和GST融合蛋白的活性,经Western Blotting检测,可与GST和七个GST融合蛋白结合,并具有特异性.因此该重组抗体分子可用于检测含GST的融合蛋白,开发成为检测试剂.该载体系统具有一定的通用性,为方便、快速地开发免疫检测试剂奠定了基础.同时,融合蛋白可在毕赤酵母中得到高表达,也有利于生产的规模化.
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