肉苁蓉苯乙醇苷的提取、纯化和抗氧化活性研究

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肉苁蓉为列当科肉苁蓉属多年生寄生植物。荒漠肉苁蓉(Cistanche deserticola Y. C.Ma)是中国传统中药,被《中国药典》收载,具有补肾阳、益精血、润肠通便等功效。苯乙醇苷是肉苁蓉的主要的活性成分,具有抗氧化、保护神经、护肝、增强记忆力、抗疲劳、改善衰老等药理活性。为提高肉苁蓉资源利用率,开发高附加值产品,促进产业化发展,本论文以生物炼制为思路,研究了适合工业化放大的超声辅助提取、大孔吸附树脂纯化等方法,对肉苁蓉中苯乙醇苷进行分离纯化。主要研究结果如下:1、建立了苯乙醇苷的检测方法。以紫外分光光度法快速检测总苯乙醇苷,以HPLC法准确测定松果菊苷和毛蕊花糖苷。2、在单因素实验的基础上,采用中心复合试验设计响应面分析法,优化了肉苁蓉苯乙醇苷的超声辅助提取工艺。最优提取工艺为:乙醇浓度52%,提取温度65℃,提取时间46min,此条件下松果菊苷与毛蕊花糖苷提取得率之和为17.02±0.11mg/g,与理论值相对误差为0.50%。该提取得率高于索氏提取法和高温回流提取法。中试放大实验的提取率略高于小试,超声辅助提取适合于肉苁蓉苯乙醇苷的提取。3、采用大孔树脂纯化肉苁蓉苯乙醇苷提取物,并研究其吸附特性。对8种不同极性及不同型号的大孔吸附树脂进行了考察,从中筛选出了最为合适的HPD300型树脂。研究了HPD300型树脂对苯乙醇苷的吸附特性,松果菊苷和毛蕊花糖苷存在竞争吸附现象。对纯化工艺进行了较为系统的研究,最适宜上样浓度为松果菊苷2.0mg/mL,毛蕊花糖苷1.6mg/mL,上样速度为1BV/h,上样量5BV。洗脱时洗脱剂乙醇的最适宜体积分数与洗脱速度分别为50%和2BV/h。冷冻干燥后所得粉末中松果菊苷质量分数为16.66%,回收率为80.41%;毛蕊花糖苷质量分数为15.17%,回收率为90.17%。所得纯化物中总苯乙醇苷质量分数为76.58%。4、对苯乙醇苷粗提物和纯化物的抗氧化活性进行了考察。与粗提物相比,纯化物具有显著的DPPH自由基清除能力和较强的还原力。选用H202损伤SH-SY5Y神经细胞,建立了细胞氧化损伤模型,表现为细胞存活率下降。低浓度的苯乙醇苷粗提物和纯化物都能有效地降低H202对该细胞的损伤,减少细胞的死亡率,其中0.1gg/mL纯化物效果最好。
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