人脐血间充质干细胞移植调节兔局灶性脑缺血再灌注炎性反应和神经保护的研究

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目的研究人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stemcells, hUCB-MSCs)移植调节兔局灶性脑缺血再灌注损伤早期炎性反应和神经保护的机制。方法采集脐带血80ml-100ml,体外分离hUCB-MSCs并传代培养,取第6代培养的细胞做治疗移植用。健康新西兰大白兔64只,随机分为假手术组、缺血再灌注组,MSC组,生理盐水组,每组16只。采用线栓法建立兔大脑中动脉缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion, MCAO),MSC组通过右腿的股静脉移植内含3mL5×106个hUCB-MSCs悬液,生理盐水组则采用同样的方式注射等量的生理盐水。早期(缺血30min,缺血再灌注后2h,4h,6h)检测各组实验动物血清及脑组织中的白细胞介素-1β(interleukinIL-1β)、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和脑组织内炎性细胞,评价hUCB-MSCs移植调节炎性反应的效果。神经元凋亡、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)、微管相关蛋白2(microtubule associated protein2,MAP2)、purdy评分的检测用于评估hUCB-MSCs移植对实验动物的神经保护作用。结果缺血再灌注组和生理盐水组血清中的IL-1β和IL-6在缺血后升高并在再灌注后2小时达到高峰,IL-10呈下降趋势。MSC组IL-1β和IL-6在早期各时间点较缺血再灌注组和生理盐水组明显降低而IL-10显著升高(P<0.05)。第3d时脑组织匀浆检测炎性因子也有相似的变化,且MSC组脑组织内炎性细胞浸润情况较缺血再灌注组和生理盐水组明显减轻,浸润的炎性细胞数减少(P<0.05)。第3d时,缺血再灌注组和生理盐水组脑组织中有大量凋亡细胞且凋亡指数(apoptosis index, AI)较高,而MSC组AI较缺血再灌注组和生理盐水组明显降低(P<0.05)。MSC组血清NGF、BDNF含量较缺血再灌注组和生理盐水组升高更为显著(P<0.05)而Purdy评分降低(P<0.05),缺血皮层区的MAP2含量亦增加(P<0.05)。结论1、脐血间充质干细胞移植可以调节兔脑缺血早期的炎性反应。2、脐血间充质干细胞移植能抑制兔脑缺血皮层神经元凋亡。3、脐血间充质干细胞移植能增加脑梗死兔血清中神经营养因子,促进神经元再生。4、脐血间充质干细胞移植能促进兔脑缺血神经功能缺损恢复。
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