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目的构建携带CXCR4基因的重组腺病毒载体并进行表达验证，筛选并获得高表达CXCR4的MSCs，在复合材料内，观察转染CXCR4基因对MSCs向SDF-1趋化能力的影响，为大范围骨缺损的治疗提供一定的理论依据和技术指标。方法1构建携带CXCR4基因的重组腺病毒载体，并进行质粒鉴定和滴度测定。2取3w SD大鼠股骨和胫骨的骨髓间充质干细胞（MSCs）进行培养，加入不同体积的腺病毒载体进行感染并筛选出最佳的感染复数（MOI），通过流式细胞仪检测细胞转染率，通过荧光定量PCR、Western-blot法验证感染MSCs内CXCR4的表达。3通过细胞材料复合培养，MTT法检测三维活性材料的细胞相容性。4取感染72h的MSCs接种于transwell孔板上层内的支架材料，下层加入含有不同浓度SDF-1α的完全培养基，联合培养3d后，通过HE染色观察MSCs深入材料生长情况，验证SDF-1/CXCR4通路在支架材料上细胞的作用。结果1通过质粒和载体鉴定，成功构建携带CXCR4基因的重组腺病毒载体，滴度为2×1010PFU/ml。2MSCs培养结果：倒置相差显微镜下观察，可见原代细胞呈悬浮状态于培养液中，接种48h后全量换液，大部分悬浮的红细胞、造血干细胞和未贴壁的MSCs被去除，可见细胞开始贴壁，散在分布，呈不规则形或梭形。继续培养约8d~10d细胞可铺满培养瓶瓶底，呈梭形，旋涡状密集生长，可以1:3进行首次传代。3通过荧光显微镜下观察和流式细胞学检测，选择出最佳重组腺病毒载体感染复数为50。通过RT-PCR和western-blot法检测出感染后的细胞CXCR4表达量明显增加。4MSCs复合支架材料复合培养实验结果：MTT法检测细胞在材料上的增殖活性，结果显示第3d、7d、14d的材料组细胞的OD值与空白组比较，二者并无统计学意义（P>0.05）。5Transwell实验结果：不含SDF-1α组，空质粒转染组，未转染组MSCs深入的距离可到达600μm，而转染并含有SDF-1α组MSCs深入距离可达到800μm，且随着SDF-1α浓度增加，细胞深入距离增加，当SDF-1浓度在200μg/L时，细胞深入距离可达到1200μm。结论1通过构建携带CXCR4基因的重组腺病毒载体感染细胞能够获得高表达CXCR4的MSCs。2SDF-1可以趋化含有CXCR4基因的MSCs，使其更多的深入骨组织工程材料内部，参与成骨作用。