本研究采用了两种分泌表达系统实现CotA漆酶在大肠杆菌的胞外表达。对两种分泌系统胞外表达CotA漆酶的情况进行了比较。结果显示在微好氧条件下由α溶血素分泌系统介导的表达菌株漆酶分泌率最高,达到78.75%。骨架载体会影响重组CotA漆酶的分泌率,这与表达载体上的相关元件差异有关。利用YebF分泌元件融合CotA漆酶基因构建的表达菌株在微好氧条件下没有胞外漆酶活性。而该重组菌株在自诱导培养条件下能够分泌表达CotA漆酶,代表不同的分泌系统所需的诱导条件也各异。而不含有任何表达元件介导CotA漆酶胞内表达的PSD菌株在微好氧培养条件下能够“胞外”表达CotA漆酶,且其胞外漆酶分泌量显著高于其他工程菌株。我们对PSD菌株分泌表达CotA漆酶的诱导条件进行了优化,发现诱导温度和硫酸铜浓度是影响目的蛋白表达的主要条件。当摇动温度为25℃,微好氧培养温度为30℃时,胞外CotA漆酶的活性达到最高值(167.2 U/L)。当培养基Cu12+离子浓度为0时,培养基上清检测不到漆酶酶活。而随硫酸铜浓度的增加,胞外漆酶活性显著提高。当Cu2+浓度为2.1 mM时漆酶活性达到最高值,硫酸铜浓度过高对PSD菌株表达CotA漆酶有严重抑制作用,这可能与大肠杆菌的铜离子抗性有关。大肠杆菌在对数生长期时开始诱导有利于胞外漆酶的表达。此外,摇瓶的规格也对PSD菌株胞外产酶率有影响。利用亲和层析技术成功实现了重组CotA漆酶的一步纯化。经SDS-PAGE分析表明重组CotA漆酶蛋白分子量约63 kD。质谱结果显示目的蛋白与枯草芽孢杆菌Spore coat protein A最为接近。纯酶催化氧化ABTS、3GZ和2,6-DDMP的最适pH分别是4.2、6.6和8.2,而氧化这三种底物的最适温度为80℃、60℃和70℃。重组CotA漆酶具有较高的热稳定性,并且在中性和碱性条件下有极强的稳定性。将纯酶至于pH 7.0、pH 9.0和pH 10.0条件下放置半个月后的剩余相对酶活分别为104.67%、243.56%和175.94%。除Mn2+和Hg2+对漆催化氧化活性造成严重抑制作用外,重组CotA漆酶对金属离子具有较好的耐受性。大部分酶抑制剂仍然对重组CotA漆酶催化具有严重抑制作用,但金属螯合物EDTA对纯酶的抑制作用较弱。当EDTA浓度高达100 mM时,CotA漆酶仅损失了近50%的催化活性。低浓度的打机溶剂和去垢剂对重组CotA漆酶的催化活性儿乎没有影响,但随钌机溶剂及去垢剂的浓度加大,抑制作用更为明显。重组CotA漆酶结合乙酰丁香酮介体对偶氮、蒽醌、靛青、芳甲烷类染料均冇良好的脱色效果。纯酶对染料的脱色效率高于粗酶液。此外实验通过对脱色条件(包括pH、温度、介休浓度、酶浓度)的改变有效提高了 CotA漆酶介休系统脱色染料的速率。实验测试了 CotA取组漆酶对模拟纺织类染料废水的脱色作用,未经条件优化的脱色反应系统48 h 后对模拟染料废水的脱色率达到68.06%,显示了 CotA漆酶耐受极端条件的优异酶学特性以及较高的染料降解能力。本研究还对PSD菌株“分泌表达”CotA漆酶的原闪进行了探索。发现铜离子是引起PSD菌株表达CotA漆酶的重要因素,向培养基中添加一定量的硫酸铜会改变大肠杆菌的渗透式,CotA漆酶可能是通过这个原因“渗透”到细胞外的。同时,本研究还考察了产CotA漆酶的表达菌株的自诱导培养,发现PSD菌株在好氧条件下依然能够胞外表达CotA漆酶。并且共表达分子伴侣能够显著提高PSD菌株胞外表达漆酶的表达量。同时通过对YSD菌株的自诱导培养在培养基中成功检测到了漆酶活性。证实YSD菌株也可以胞外表达CotA漆酶。