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第一部分胃癌中CD14+HLA-DR-/low骨髓来源的抑制细胞对T细胞的免疫抑制效应目的:检测人胃癌组织中一群骨髓来源的抑制细胞(MDSC)表面CD14及HLA-DR分子标志的表达,并研究由该群细胞介导的T淋巴细胞免疫抑制效应。方法:收集并制备19例人类胃癌组织及癌旁正常胃壁组织标本的单个核细胞悬液,运用流式细胞术检测同一病例来源中两种组织CD14+HLA-DR-/low骨髓来源的抑制细胞的表达差异;然后运用统计学分析该群细胞在胃癌组织中表达差异与临床病理特征的关系。同时,采用免疫磁珠分选肿瘤组织及正常胃壁组织所获单细胞悬液中的CDl4+单个核细胞,并将两者分别与正常人外周血中的CD4+T淋巴细胞进行共培养,观察其对CD4+T淋巴细胞中IFN-γ和IL-2两种细胞因子表达的抑制作用。结果:流式细胞术检测所获单个核细胞相应的表面标志,结果显示胃癌组织中CD14+HLA-DR-/low骨髓来源的抑制细胞的比例为(13.2±8.0%,n=19),癌旁正常胃壁组织中CD14+HLA-DR-/low骨髓来源的抑制细胞的比例为(8.3±2.8%,n=19),两者比例同组对照具有统计学差异(P<0.05)。统计学方法分析显示CD14+HLA-DR-/low骨髓来源的抑制细胞在肿瘤组织中的浸润比例与分化程度、肿瘤浸润深度及临床分期相关(p<0.05)。进一步的体外免疫功能学实验结果显示:与癌旁组织相比,胃癌组织中的CD14+单个核细胞更明显的抑制了CD4+T淋巴细胞中IFN-γ(16.2±1.3%VS.8.1±2.3%,P<0.05)及IL-2(13.7±2.1%VS.8.2±2.5%,P<0.05)的表达。结论:人类胃癌组织中T细胞的免疫功能受抑制与肿瘤微环境中CD14+HLA-DR-/low骨髓来源的抑制细胞的募集相关。第二部分VIP在CD14+HLA-DR-/low骨髓来源的抑制细胞的诱导分化中的作用目的:探讨血管活性肠肽(VIP)在诱导人外周血CD14+单个核细胞分化成为具有免疫抑制活性的CD14+HLA-DR’/low骨髓来源的抑制细胞中的作用及相关机制。方法:采用免疫磁珠分选技术分选正常人外周血PBMC中的CD14+单个核细胞,并使用含有不同浓度的VIP进行诱导,再将所得细胞与正常CD4+T淋巴细胞进行共培养,应用流式细胞术检测CD4+T淋巴细胞中免疫相关细胞因子IFN-γ和IL-2的表达。另外,运用ELISA法检测上述培养基中IL-10的表达量,并通过加入IL-I0阻断剂观察其是否具有逆转经VIP诱导的CD14+PBMC对CD4+T淋巴细胞中IFN-y和IL-2表达的抑制效应。结果:经过一定浓度VIP (10-7M)诱导的CD14+PBMC相对于未经VIP诱导的对照组,与正常人外周血的CD4T淋巴细胞共培养后,IFN-γ和IL-2的表达明显受到抑制(分别为9.8±1.4%VS.15.1±3.1%和30.4±4.3%VS.37.7±7.2%,P<0.05)。与此同时,在更高浓度VIP (1O-6M)的诱导下,CD14+PBMC虽然同样表现出对CD4+T淋巴细胞中IFN-γ和IL-2表达的抑制作用,(分别为9.2±1.5%和29.9±3.7%,P<0.05),但VIP组间并无剂量依赖趋势(分别为9.2±1.5%VS.9.8±1.4%和29.9±3.7%VS.30.4±4.3%,P>0.05)。进一步通过ELISA法测得,在经VIP诱导的CD14+PBMC参与的共培养体系中,IL-10的表达量上调(P<0.05)。在加入IL-I0阻断剂后,使用一定浓度VIP诱导CD14+PBMC的实验组与未使用VIP的对照组相比,共培养后CD4+T淋巴细胞IFN-γ和IL-2的表达量并无差异(P>0.05)结论:VIP具有诱导人外周血CD14+TBMC向具有免疫抑制功能的CD14+HLA-DR-/low MDSC分化的作用,并且此分化细胞对CD4+T淋巴细胞的免疫抑制作用依赖于IL-I0表达量的增加。