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目的：从多药耐药膜转运蛋白角度探讨高分化胰腺癌的耐药及调控机制；研究阻断体外培养的人高分化胰腺癌细胞株SW1990 IGF-ⅠR环路对多药耐药蛋白MRP表达的调节作用；评价IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染对SW1990胰腺癌细胞株化疗敏感性的影响。方法：1、收集2000.4-2001.12月间四家医院的高分化胰腺癌手术切除病理标本26例，每个标本作连续切片，采用免疫组化SP法分别检测三种多药耐药膜转运蛋白P-gp、MRP、LRP和IGF-ⅠR在胰腺癌组织和癌周组织中的表达，并作对比研究和相关性分析；2、采用自行设计的混合骨架IGF-ⅠR反义寡核苷酸，在非脂质体配方的FugeneTM6试剂介导下转染体外培养指数期生长的高分化胰腺癌细胞株SW1990，在转染后12、24、48、72、96小时连续观测IGF-ⅠR的水平变化，了解该序列IGF-ⅠR反义寡核苷酸对IGF-ⅠR表达的干预效果；同时，免疫组化、Wester-blot和RT-PCR检测转染对MRP在蛋白和mRNA水平表达的影响。3、在前面研究的基础上，采用不同剂量IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染SW1990细胞，高效液相色谱仪比较转染前后5-氟脲嘧啶、丝裂霉素、Gemcitabine三种不同结构化疗药物在细胞内蓄积浓度的变化；四氮唑蓝法、流式细胞仪和AO荧光染色检测转染联合化疗对胰腺癌细胞杀伤效应、细胞周期和凋亡易感性的影响。设立空白转染、DMEM假转染和IGF-ⅠR正义寡核苷酸转染作为对照组。结果：1.1、在高分化胰腺癌组织中，三种多药耐药膜转运蛋白呈差异性表达：MRP最高（76.9%），P-gp次之（42.3%），LRP仅7.69%；而癌旁组织中，其表达亦不均衡：P-gp为34.6%，MRP7.69%，LRP未检测到表达；MRP在胰腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P<0.05），但P-gp和LRP在胰腺癌和癌旁组织的表达则无明显差异（P＞0.05）；1.2、IGF-ⅠR在高分化胰腺癌组织中过度表达（73.1%），而在癌周基本不表达，相关分析显示，IGF-ⅠR与MRP在高分化胰腺癌组织中的表达明显正相<WP=10>关（rs=0.711，P<0.02）。2.1、体外培养的SW1990胰腺癌细胞呈典型的上皮样细胞生长特征，高表达IGF-ⅠR和MRP，免疫组化显示表达部位主要位于细胞的胞浆和胞膜，而部分胞核也可着色；2.2、IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染后，SW1990胰腺癌细胞的IGF-ⅠR在蛋白和mRNA水平均明显下降，与对照组相比差异显著（P<0.05）：免疫组化显示IGF-ⅠR蛋白的阳性表达率在空白对照组为84.2%，转染后12、24、48、72、96小时分别为51.3%、22.6%、19.7%、38.8%和62.4%；RT-PCR显示各时相点IGF-ⅠR mRNA的表达量分别是空白对照组SW1990胰腺癌细胞表达水平的60.6%、34.2%、26.3%、45.8%和76.5%；2.3、IGF-ⅠR反义寡核苷酸能显著下调SW1990胰腺癌细胞MRP在蛋白和mRNA水平的表达（P<0.05），且与IGF-ⅠR变化规律一致：在转染12、24、48、72、96小时，MRP的表达量分别是空白转染组的83.6%、52.6%、39.3%、62.6%和91.8%（免疫组化SP）；58.3%、38.6%、29.5%、54.4%和81.1%（Western-blot）；52.6%、30.9%、25.5%、48.3%和76.8%(RT-PCR)。3.1、IGF-ⅠR反义寡核苷酸能明显提高化疗药物在SW1990胰腺癌细胞内的蓄积浓度，与对照组比较差异显著（P<0.05），蓄积浓度随反义寡核苷酸转染剂量的升高而增加；3.2、单纯IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染对SW1990胰腺癌细胞有低水平的杀伤效应，而转染联合化疗对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强，显著高于单纯化疗组和转染组（P<0.05），并分别随转染剂量和化疗给药浓度的增加而增强；3.3、流式细胞仪检测发现，给予单纯化疗干预或反义寡核苷酸转染，细胞周期均出现相同变化：G0/G1期细胞比例上升，G2、M期比例下降；而反义寡核苷酸转染联合化疗，则对SW1990的细胞周期抑制作用更为明显，无论与单纯反义寡核苷酸转染还是化疗相比，G0/G1期细胞比率均有显著上升；3.4、AO荧光染色显示，指数期生长的人胰腺癌细胞株SW1990自然凋亡率极低，仅为0.72%左右；在与化疗药物共同孵育后，出现典型的凋亡表现，凋亡率随化疗浓度升高而增加；在IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染后，可出现SW1990细胞凋亡的显著增加（P<0.05），两者有量效关系；但在IGF-ⅠR反义寡核苷酸转染联合化疗时，细胞凋亡率只在较低转染水平和化疗浓度时呈上升趋势，而在较高的转染水平和化疗浓度时反而下降。结论：1、MRP是高分化胰腺癌组织中的“优势耐药蛋白”，在胰腺癌和癌周组织中的差异性表达提示它是肿瘤发生和行进过程中获得的一种新型耐药机制；2、IGF-ⅠR作为许多恶性肿瘤的共性标志物，是一种具有强大生物学活性的调节因子，在高分化胰腺癌组织中过度表达，可能参与多药耐药蛋白MRP的调控，是MRP的重要上游事件；3、体外培养的SW1990人胰腺癌细胞株同时高表达IGF-ⅠR和MRP，可作为研究原发性多药耐药的良好细胞模型；4、与前期的反义技术相比较，本研究所设计的IGF-ⅠR反义寡核苷酸对IGF-ⅠR的干预在起效时间、下调幅度和持续抑制上都有明显提高，这得益于IGF-ⅠR反义寡核苷酸靶序列的确立、活性基团的修饰和<WP=11>FugeneTM6试剂的辅助转染；5、IGF-ⅠR反义寡核苷酸可明显抑制胰腺癌细胞株SW1990的MRP表达，证实IGF-ⅠR对MRP的调控作用，即通过某种内在化机制在mRNA水平干扰MRP