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第一部分：长链非编码RNA-SNHG6在肝癌中的表达及对肝癌肿瘤生物学行为的影响目的：本部分研究旨在观察长链非编码RNA SNHG6在原发性肝癌中(HCC)的表达,SNHG6的表达与患者临床预后的关系以及SNHG6对肝癌细胞肿瘤生物学行为的影响。方法:RT-qPCR技术检测SNHG6在原发性肝癌组织与肝癌细胞株中的表达差异,原位杂交(ISH)、荧光原位杂交(FISH)技术进一步验证SNHG6在原发性肝癌组织与肝癌细胞株中的表达差异；结合HCC患者临床及生存资料,分析SNHG6的表达与HCC患者临床病理学资料的相关性。Kaplan-Meier分析SNHG6表达高低与患者生存率及无复发生存率之间的关系；建立COX回归模型结合单多因素确立影响HCC患者预后的独立危险因素；基因沉默-过表达技术干扰和过表达SNHG6,流式细胞分析技术检测肝癌细胞周期、凋亡的改变,细胞划痕、Transwell实验观察肝癌细胞迁移、侵袭的变化,CCK8、EdU检测肝癌细胞生长活性的差异;体内裸鼠模型验证沉默SNHG6肝癌细胞成瘤和肺转移能力的差别。结果：SNHG6在肝癌组织及肝癌细胞中表达显著升高；SNHG6的表达与患者的组织学分型、HBV感染、门静脉癌栓(PVTT)、BCLC分期密切相关(p<0.05)。SNHG6高表达患者3年总生存率及无转移复发率明显低于低表达患者组(p<0.05),且SNHG6是影响HCC患者预后独立的一个危险因素(p<0.01)；SNHG6在体外可以促进肝癌细胞的增殖、抑制肝癌细胞凋亡,促进肝癌细胞的生长、迁移和转移；动物实验表明沉默SNHG6可以在体内抑制肝癌细胞的生长及转移能力。结论：SNHG6在HCC发生、发展过程中起着促癌基因的作用,SNHG6可以作为HCC患者预后不良的潜在预警指标。第二部分：长链非编码RNA-SNHG6通过竞争性结合miR-101-3p调控肝癌EMT目的：本部分研究旨在探讨长链非编码RNA SNHG6作为ceRNA促进肝癌细胞侵袭转移的可能的分子机制。方法：生物信息学软件预测SNHG6可能结合的miRNA(miR-101-3p)及miR-101-3p下游靶基因(ZEB1),RT-qPCR检测miR-101-3p在肝癌组织中的表达并分析其与SNHG6表达的相关性及SNHG6与ZEB1表达的相关系；荧光素酶报告基因实验进一步验证SNHG6与miR-101-3p的互作靶点,荧光素酶报告基因实验检测SNHG6对ZEB1 3’UTR的调控作用；设计点突变SNHG6过表达载体,沉默SNHG6过后再转染点突变及野生型SNHG6过表达载体,Western blotting观察ZEB1的产生；光学显微镜观察沉默SNHG6肝癌细胞形态学的变化,Western blotting、细胞免疫荧光、RT-qPCR检测沉默SNHG6 EMT相关标志分子(E-cadherin、Claudin、Vimentin、Fibronection)蛋白及mRNA的水平。结果：miR-101-3p在肝癌组织中表达明显下调,且和SNHG6的表达呈明显负相关关系,SNHG6的表达受miR-101-3p的调控。ZEB1是miR-101-3p下游的靶标基因,miR-101-3p通过靶向结合ZEB1 mRNA 3’UTR抑制后者的表达。SNHG6的212bp-234bp是与miR-101-3p相互结合的作用位点。SNHG6可以作为ceRNA竞争性靶向结合miR-101-3p从而解除miR-101-3p对靶标基因ZEB1的抑制作用,进而调控ZEB1 mRNA 3’UTR的活性,最终调控ZEB1蛋白的表达。点突变实验证实SNHG6对ZEB1的调控作用依赖于SNHG6与miR-101-3p间的结合位点,突变结合位点后SNHG6对ZEB1的调控作用消失。此外在HCC中SNHG6通过上调ZEB1的水平进而诱导HCC EMT的产生,最终促进HCC的侵袭转移。结论：SNHG6作为ceRNA通过竞争性结合miR-101-3p上调ZEB1的表达,诱导EMT的发生,促进HCC的侵袭转移。SNHG6可以作为抗HCC侵袭、转移治疗的潜在靶点。第三部分：长链非编码RNA-SNHG6通过结合UPFl影响肝癌TGF-β/Smad通路目的：本部分旨在研究SNHG6通过RNA结合蛋白参与HCC发生、发展的分子通路。方法：生物信息学软件预测SNHG6可能结合的RNA结合蛋白(UPF1),RNA免疫共沉淀-深度测序(RIP-seq)进一步验证二者之间的结合。免疫组织化学染色、Western blotting、RT-qPCR检测UPF1在肝癌组织及肝癌细胞中蛋白及mRNA表达水平并分析SNHG6与其在肝癌组织中表达的相关性。利用RNAi技术在肝癌细胞株中沉默UPF1,Western blotting、细胞免疫荧光检测UPF1与Smad7蛋白的产生并分析二者表达的相关性。Western blotting技术观察在肝癌细胞株中沉默-过表达SNHG6 UPF1和Smad7蛋白水平的产生。最后利用Western blotting技术检测沉默-过表达SNHG6 TGF-β/Smad通路上关键分子(Smad2/3、 p-Smad2/3)的变化。结果：UPF1在肝癌组织及肝癌细胞中表达显著下调,UPF1在HCC中能够靶向抑制Smad7蛋白的表达。SNHG6能够结合UPF1并降低其稳定性下调其蛋白水平的表达。SNHG6通过UPF1调控Samd7蛋白的表达,进而影响TGF-β/Samd通路关键分子(p-Smad2/3)的表达。结论：SNHG6通过结合RNA结合蛋白UPF1调控TGF-β/Samd通路,进而影响HCC进程。