亮叶杨桐的抗氧化活性研究

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糖尿病是由于胰岛功能障碍、胰岛素抵抗等引起的机体内碳水化合物代谢紊乱综合征。糖尿病及其并发症已经成为继心脑血管疾病、癌症之后威胁人类生命健康的第三大杀手。近年越来越多的研究显示,糖尿病患者体内过多的活性氧会加剧糖尿病及诱发糖尿病的慢性并发症的发生和发展。因此改善体内氧化能力成为治疗糖尿病及其并发症的重要手段,而黄酮类化合物有非常好的抗氧化活性,是目前寻求新的天然抗氧化剂、抗氧化应激的研究热点。亮叶杨桐系山茶科(Theaceae)杨桐属(Adinandra)植物,亮叶杨桐(Adinandra nitida Merr. ex H. L. Li)的干燥叶,富含黄酮、酚类物质,具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。在我国南方广西等地使用历史悠久。然而学术界对亮叶杨桐的研究比较滞后,相关文献资料报道较少,其对糖尿病及其并发症的影响更是空白。为了丰富亮叶杨桐的药理活性研究,寻找其主要的药理活性组分,本论文将石芽茶的乙醇提取物分为极性不同的四个组分,通过体外抗氧化模型、细胞水平抗氧化实验以及STZ糖尿病大鼠模型等系统研究不同组分的抗氧化活性及其降糖效果,旨在探讨探讨抗氧化活性的物质基础,阐明其对糖尿病及其并发症的影响机制。主要内容有:(1)亮叶杨桐不同组分化学成分研究将亮叶杨桐乙醇提取物用不同溶剂划分为四个极性不同的组分,测定各个组分的总黄酮和总酚含量。结果发现:黄酮在乙酸乙酯和正丁醇部位的含量最高,其中正丁醇部位的黄酮类成分山茶苷A的含量为433.87mg/g。福林酚法测得的总酚含量在乙酸乙酯最高,含量为367.9mg/g。对乙酸乙酯组分和正丁醇组分进行进一步分离中得到两个化合物,经结构鉴定,为山茶苷A和芹菜素。(2)体外抗氧化活性研究将各个组分通过体外清除自由基、HepG2细胞模型抗氧化实验测定对体外各种自有基(如超氧阴离子、羟基自由基、DPPH、ABTS自由基等)的清除能力及总还原能力,并且测定各部位对HepG2细胞内活性氧的清除能力。结果发现乙酸乙酯和正丁醇两个组分的抗氧化能力较强。(3)以STZ糖尿病大鼠为模型的体内抗氧化影响的研究对体外抗氧化实验筛选出来的两个活性组分乙酸乙酯和正丁醇组分通过STZ诱导糖尿病大鼠模型进行长期动物实验,考察亮叶杨桐各活性组分体内抗氧化的能力。结果发现,大鼠血浆中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力显著升高、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量明显下降。(4)降糖机制初步研究α-糖苷酶抑制和HepG2细胞葡萄糖吸收的试验在长期动物实验中发现亮叶杨桐乙酸乙酯组分和正丁醇组分可以逐步降低STZ诱导的糖尿病大鼠空腹血糖(FBG),且乙酸乙酯组分使血糖的降幅更大,血浆胰岛素含量也显著增加。针对亮叶杨桐明显降低STZ诱导的糖尿病大鼠血糖的活性组分,探求其降糖机制。我们检测亮叶杨桐活性组分对HepG2细胞葡萄糖摄取的影响以及对α-糖苷酶的抑制活性。结果发现,亮叶杨桐活性组分对大鼠血糖的影响不是通过促进细胞摄取葡萄糖降低血浆葡萄糖含量,也不是通过抑制α-糖苷酶活性,减少多糖分解成葡萄糖。推测其降糖机制可能是提高机体酶促抗氧化防御系统如SOD、CAT的活力,增强自身抗氧化、清除自由基的能力,促进损伤的胰岛细胞修复,改善胰岛细胞的生理功能,实现胰岛素分泌水平的正常化,恢复体内糖类的正常代谢,实现整体的降糖效果,能够改善糖尿病及其并发症的发生与发展。
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