盐地碱蓬SsPIP基因的分子克隆及在盐胁迫下的表达特性分析与大豆遗传转化系统的建立

来源 :山东师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:taobaowang1312
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该实验室成功的从盐地碱蓬中克隆到位于液泡膜上的Na<+>/H<+>反向转运蛋白基因SsNHX1,转化拟南芥并对该基因的功能进行了分析,发现在拟南芥中过量表达该基因可以显著提高植物的耐盐性.我们现在主要是将SsNHX1基因导入大豆中以期获得耐盐的转基因植株.实验主要利用农杆菌介导的转化方法:首先根据pRoKⅡ质粒的多克隆位点,选用KpnⅠ和BamHⅠ双酶切pMD18∷SsNHX1,回收17Kb的片段定向克隆于植物表达载体pROKⅡ中,筛选获得含SsNHX1的植物表达载体;然后用带有SsNHX1基因和NPTⅡ基因的pRoKⅡ质粒转化农杆菌EHA105;再用整合有外源基因的农杆菌EHA105侵染大豆子叶节,经过选择分化培养获得抗性植株后,对抗性植物做了PCR检测,结果在抗性植株中扩增出了与目的基因大小一致的条带,初步说明SsNHX1基因已整合到大豆基因组中.
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