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本论文主要对组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDT701和OsHDA704的功能进行了研究,同时对OsHDA702和OsHDT702做了部分工作,实验结果如下: 1.序列分析显示OsHDT701和OsHDA704的启动子含有多个光、胁迫、激素和发育响应的顺式作用元件;亚细胞定位预测OsHDT701可能定位与细胞核,OsHDA704定位与细胞核、细胞质和线粒体;表达谱分析显示OsHDT701和OsHDA704对生长发育和胁迫反应过程都有响应。 2.启动子转基因植株GUS染色结果显示OsHDT701为组成型表达;OsHDA704主要在根尖、幼苗茎端、成熟叶片、叶鞘、茎、花药和胚胎中表达;OsHDT702在花药中特异表达;亚细胞定位观察显示OsHDT701定位在细胞核,OsHDA704主要定位在细胞核和细胞质。 3.构建OsHDA702超表达和RNAi载体并转化水稻成熟胚愈伤,得到T2代转基因株系;筛选OsHDT701和OsHDA704转基因纯合株系并利用实时荧光定量PCR验证超表达株系中目的基因的表达水平有不同程度的上调,RNAi株系中目的基因的表达水平也有不同程度的下调。 4.与对照比较,OsHDT701超表达后出现种子变小、萌发慢、生长缓慢、晚抽穗和易感病等表型;OsHDA704超表达后种子萌发较快、生长缓慢、叶片气孔密度降低、关闭状态气孔占多数和对2,4-D表现不敏感,RNAi株系则相反;在萌发阶段,OsHDT701超表达株系对ABA、NaCl和PEG6000敏感,OsHDA704超表达株系与之相反。在苗期,OsHDT701超表达株系对ABA,NaCl和PEG6000不敏感,OsHDA704超表达株系对NaCl和PEG6000不敏感,OsHDA704-RNAi株系则相反。 5.种子萌发过程中,OsHDT701超表达株系中GA合成酶基因表达量下降,乙酰化水平也下降;OsHDA704超表达株系中OsABI1和OsABI2表达量下降,而OsABI5、气孔发育基因和胁迫应答基因表达上调;OsHDA704超表达株系中OsABI1、OsABI2和OsDST的乙酰化水平下降。 6.基因芯片结果显示,OsHDT701中涉及的表达变化基因有外界刺激应答、胁迫应答、花发育、种子成熟、转录、蛋白修饰、DNA代谢、氨基酸代谢和脂类代谢等;OsHDA704中表达变化基因主要涉及到胁迫响应、营养物质代谢、花粉和柱头互作、转录和蛋白修饰等。 7.利用酵母双杂交筛选到OsHDT701互作蛋白21个,它们主要涉及一些酶类、乙烯响应转录因子、光合作用、开花和种子发育相关蛋白等;筛选到OsHDA704互作蛋白29个,主要涉及一些酶、单链核苷酸结合蛋白、钙离子结合的RNA运输蛋白和TGF-beta受体结合蛋白等。