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为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV的基因序列设计并合成3对特异性引物,分别为CO-ORF7、EU-ORF5和AM-Nsp2;利用CO-ORF7扩增美洲型和欧洲型毒株ORF7基因433bp/398bp片段；利用(?)AM-Nsp2扩增美洲型经典毒株和变异毒株Nsp2基因338bp/248bp片段；利用EU-ORF5扩增欧洲型毒株ORF5基因614bp片段。经过反应条件的优化,成功建立了能同时检测并区分美洲型经典毒株、高致病性变异毒株以及欧洲型毒株的多重RT-PCR检测方法。该方法可以特异扩增PRRSV对应的基因片段,而与猪瘟病毒(CSFV)、猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应；对重组质粒标准品的检出下限为1.67×103拷贝/μL；在相同条件下进行的重复试验可获得均匀一致的结果。应用检测PRRSV的多重RT-PCR方法对临床采集的176份疑似病料进行检测,结果PRRSV阳性45份,其中美洲型变异毒株41份、经典毒株4份,未检测到欧洲型毒株。针对临床上PRRSV和CSFV混合感染时有发生的情况,为建立能同时检测CSFV和PRRSV的方法,针对CSFV和PRRSV的基因序列设计3对特异性引物,即CSF-NS2、AM-Nsp2、、EU-ORF5。其中,CSF-NS2扩增CSF毒株NS2基因508bp片段,／(?)M-Nsp2扩增PRRS美洲型经典毒株和变异毒株Nsp2基因338bp/248bp片段,EU-ORF5扩增PRRS欧洲型毒株ORF5基因614bp片段。经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSF毒株和PRRS美洲型经典毒株、变异毒株及欧洲型毒株的多重RT-PCR方法。该方法可以特异扩增CSFV和PRRSV,而与FMDV、PRV、PPV、PCV2均无交叉反应；对CSFV和PRRSV4种重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝/μL。应用该方法对采集的106份临床疑似病料进行检测,结果CSFV和PRRSV变异株混合阳性4份,占3.77%(4/106)；CSFV阳性7份,占6.60%(7/106)；PRRSV变异株阳性17份,占16.04%(17/106)。本研究成功建立了的两种检测PRRSV的多重RT-PCR方法,一是同时检测美洲型及欧洲型PRRSV的多重RT-PCR方法,二是同时检测CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV的多重RT-PCR方法,为PRRSV和CSFV的临床快速鉴别检测和流行病学调查提供了有效的技术平台。