论文部分内容阅读
第一部分慢性社会挫败应激对小鼠脑中PRCP的mRNA及其蛋白水平的影响目的:黑皮质素受体4(melanocortin-4 receptor,MC4R)在心境障碍(mood disorders)疾病的发生、发展中扮演着非常重要的角色,据报道伏隔核(nucleusaccumbens,NAc)中MC4R激活可以促进抑郁样行为的发生。MC4R内源性的激动剂是α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)。脯氨酰羧基肽酶(prolylcarboxypeptidase,PRCP)可以将α-MSH尾部的脯氨酸降解,从而使α-MSH失去激动MC4R的能力。有研究表明,与抑郁症有密切联系的海马(hippocampus)和内侧前额叶皮层(medial prefrontal cortex,m PFC)这两个脑区中PRCP的表达较为丰富。为了明确PRCP与抑郁症之间的关系,我们检测了经慢性社会挫败应激(chronic social defeat stress,CSDS)后的小鼠hippocampus、m PFC和NAc这三个脑区PRCP的mRNA和蛋白表达变化情况。方法:构建小鼠CSDS模型的,诱导小鼠出抑郁样行为;利用社会接触(social interaction test,SIT)和糖水偏好(sucrose preference test,SPT)两种行为学检测来筛选出CSDS易感小鼠;应用实时定量聚合酶链式反应(Real time quantitative PCR,RT q-PCR)分析目的基因PRCP的mRNA表达水平;应用蛋白免疫印迹(western blotting)技术检测PRCP蛋白表达水平。结果:(1)CSDS诱导小鼠抑郁样行为,与对照组相比,易感小鼠的糖水偏好率显著性下降(n=7,P<0.01)。易感小鼠的社会接触比率与对照组相比有明显下降(n=7-8,P<0.01),社会接触时间也有明显下降(n=7-8,P<0.05)。(2)与对照组相比,易感组小鼠hippocampus脑区PRCP的mRNA水平没有统计学差异(n=6),m PFC脑区PRCP的mRNA也无明显变化(n=4);NAc脑区PRCP的mRNA水平显著下降,差异具有统计学意义(n=11,P<0.05)。(3)对照组与易感组hippocampus脑区PRCP蛋白表达无统计学差异(n=8);m PFC脑区对照组与易感组小鼠PRCP蛋白表达无明显改变(n=6)。(4)易感组与对照组相比,NAc core脑区的PRCP蛋白表达水平下降10%(n=12),但差异无统计学意义;NAc shell脑区PRCP蛋白质表达水平则显著下降(n=8,P<0.05);免疫荧光显示NAc shell脑区相较于NAc core脑区PRPC阳性信号较多。结论:CSDS明显增加小鼠抑郁样行为,易感PRCP的mRNA和蛋白在应激易感小鼠的NAc脑区下降最为明显。第二部分调控PRCP对慢性社会挫败应激引起的小鼠抑郁样行为的影响目的:NAc是调控大脑奖赏环路的重要脑区,我们采用分子生物学方法在NAc脑区过表达PRCP蛋白,观察应激敏感小鼠的抑郁样行为是否得到改善。另一方面,我们应用药理学方法给予正常小鼠PRCP抑制剂,研究抑制PRCP是否易化阈下刺激诱导正常小鼠抑郁样行为的产生。方法:采用慢性社会挫败应激诱导小鼠的抑郁样行为,结合社会接触和糖水偏好检测筛选出抑郁易感小鼠;应用脑立体定位注射技术向小鼠NAc脑区注射腺相关病毒,利用荧光显微镜观察病毒表达的荧光信号,Western Blotting方法验证目标蛋白的表达是否增加,结合社会接触和糖水偏好检测观察过表达PRCP是否逆转易感小鼠的抑郁样行为;正常小鼠腹腔注射PRCP抑制剂N-苄氧酰基羰-脯氨酰-脯氨酸(Z-Pro-prolinal,ZPP),观察抑制PRCP是否易化阈下刺激诱导的小鼠抑郁样行为。结果:(1)小鼠NAc脑区注射腺相关病毒(AAV-PRCP-e GFP)诱导带有荧光标签的PRCP-e GFP蛋白过表达,两周后小鼠NAc脑区出现了明显的荧光信号并可以检测到PRCP-e GFP蛋白显著上升(n=6,P<0.001)。(2)NAc脑区注射过表达易感PRCP的腺相关病毒可明显改善小鼠的抑郁样行为。(3)正常小鼠腹腔注射PRCP抑制剂ZPP后进行CSDS阈下刺激,ZPP共设置20mg/kg、40mg/kg和80mg/kg三个剂量组,ZPP注射后小鼠的24h摄食量无显著性改变。单因素方差分析结果显示ZPP显著性降低小鼠的社会接触行为,两两比较后发现80mg/kg剂量组效果最为明显(n=8,P<0.05),这一效应被NAc脑区注射MC4R抑制剂SHU9119所取消。各组糖水偏好率检测结果并没有明显差异。表明ZPP通过MC4R来诱导抑郁样行为的产生。结论:NAc脑区过表达PRCP蛋白显著性改善应激易感小鼠的抑郁样行为。在不改变摄食行为的情况下,PRCP抑制剂易化阈下刺激诱导正常小鼠产生抑郁样行为,该效应可以被MC4R的抑制剂SHU9119所阻断。