论文部分内容阅读
目的:研究快眼动(Rapid eye movement,REM)睡眠剥夺对大鼠下丘脑和中脑神经肽B(Neuropeptide B,NPB)、神经肽W(Neuropeptide W, NPW)及其受体G蛋白耦合受体(G-protein-coupled receptor,GPR)7以及食欲素原(prepro-oxerin)mRNA转录水平的影响。进一步研究REM睡眠剥夺对下丘脑外侧区及中缝背核NPB蛋白表达的影响,探讨NPB、NPW以及oxerin在睡眠-觉醒中的调节作用。方法:SD雄性大鼠40只,随机分为正常对照组(cage control,CC)、REM睡眠剥夺(REM sleep deprivation,RD)1天、3天及5天组。每组10只。采用改良多平台睡眠剥夺装置(MMPM)制造睡眠剥夺模型,实时荧光定量PCR(real-timePCR,RT-qPCR)检测正常睡眠和不同时间REM睡眠剥夺后大鼠下丘脑和中脑NPB、NPW及其受体GPR7和prepro-oxerin mRNA的转录情况,免疫荧光测定大鼠下丘脑外侧区、中脑中缝核处NPB蛋白的表达。结果:1. REM睡眠剥夺对大鼠下丘脑及中脑NPB、NPW及其受体GPR7以及prepro-oxerin mRNA转录水平的影响。(1)在下丘脑,相对于CC组,prepro-oxerin mRNA在RD1d、RD3d组转录水平增加(P<0.01),GPR7mRNA的转录水平下降(P<0.01),等到RD5dprepro-oxerin mRNA的转录水平下降接近CC组时,NPB mRNA及GPR7mRNA转录水平开始增加(P<0.01)。本实验并未发现RD对NPW mRNA转录水平有明显影响。(2)在中脑,NPB及NPW mRNA在RD3d和RD5d组较于CC组转录水平明显下降(P<0.01),但RD1d组和CC组之间无明显差异(P>0.05)。GPR7mRNA在RD5d组与CC相比转录水平明显降低(P<0.01),而在RD1d、RD3d组与CC组相比无明显差异(P>0.05)。prepro-orexin mRNA在RD1d、RD3d组较于CC组转录水平明显增高(P<0.01),在RD5d组转录水平下降,但仍高于CC组(P<0.01)。2. REM睡眠剥夺对大鼠下丘脑外侧区及中缝背核NPB蛋白表达的影响下丘脑外侧区(LH),NPB免疫阳性细胞在RD1d和RD3d组与CC组相比没有明显增多(P>0.05),在RD5d组增多明显(P<0.01)。在中缝背核(DR),与CC组相比,RD1d、RD3d及RD5d组NPB免疫阳性细胞均明显增多(P<0.01),且呈上升趋势。3.NPB免疫阳性细胞在脑组织中的分布NPB免疫阳性细胞不仅存在于下丘脑腹内侧核、背内侧核、弓状核、视交叉上核和未定带腹侧区及中脑的腹侧被盖区,中缝背核,黑质等区域。还见于基底前脑的VDB (vertical diagonal band, VDB)和HDB (horizontal diagonalband,HDB),内、外侧苍白球,丘脑网状核,脑干的中缝隐核、中缝正中核、中缝旁正中核、前被盖核、横纹肌核、旁正中网状核、巨细胞网状核等。结论:下丘脑和中脑的NPB及其受体GPR7可能参与了睡眠-觉醒的调节,且效应可能与该处orexin相反。中脑的NPW和NPB可能有相似的睡眠-觉醒调节功能。NPB可能与REM睡眠剥夺后的能量代谢及情绪异常有关。