论文部分内容阅读
目的:早期使用阿托伐他汀钙、促红细胞生成素干预激素引起的股骨头坏死大鼠动物模型,探讨两种不同药物对激素性股骨头坏死的预防效果与联合使用两种药物的疗效是否有差异。为临床中需要使用激素治疗的患者预防股骨头坏死提供可能的理论和实验依据。方法:准备同批次6周龄健康雄性SD大鼠50只。随机选取其中40只予以2μg/kg脂多糖腹腔注射,间隔24h后注射第二次。第二次注射24h后予以40mg/kg甲强龙肌肉注射,每次间隔24h共进行3次注射建立激素性股骨头坏死模型。建模后将40只大鼠按随机数字法均分为4组。激素性股骨头坏死模型组10只（MT）每日予以生理盐水灌胃及鼠尾静脉注射进行干预;阿托伐他汀钙干预组10只（AT）每日给予lmg/kg的阿托伐他汀钙灌胃及鼠尾静脉注射生理盐水进行干预;促红细胞生成素干预组10只（ET）每日给予500U/kg r Hu EPO尾静脉注射及等量生理盐水灌胃干预;两种药物联合干预组10只（AET）,每日给予lmg/kg的降脂药阿托伐他汀钙灌胃+500U/kg r Hu EPO尾静脉注射。将剩下10只大鼠作为空白对照组（C T）每日予以等量生理盐水灌胃、等量生理盐水鼠尾静脉注射。使用普通饲料及一般饮用水喂养5组大鼠,每周测量大鼠体重。喂养5组大鼠4周后。使用摘眼球采血法对每只大鼠进行采血2ml,对血液标本进行离心收集上层血清,使用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清中I型前胶原N-端前肽（P1NP）、大鼠β-骨胶原交联（β-CTx）及I型胶原C端肽（CTx-1）的含量。采血后对大鼠进行颈椎脱位处死,完整取出双侧后肢股骨头,观察股骨头大体形态变化。随机选取一侧大鼠股骨头送Micro-CT扫描,选取股骨头松质骨取作为感兴趣区域,测定并且记录相关骨组织参数:＿BV/TV、Tb.Th、Tb.N、BS/BV及Tb/Sp。对侧股骨头去除多余的软组织后依次通过4%多聚甲醛固定、骨组织脱钙及蜡块包埋制成病理切片后,对组织进行HE染色后进行组织形态学观察,计算空骨陷窝率。并根据空骨陷窝数量、核固缩或伴有骨髓坏死判断是否发生股骨头坏死,计算股骨头坏死率。实验数据用均数±标准差（x±s）表示,本研究数据均采用SPSS 26.0统计处理数据,组间比较采用单因素方差分析,P＜0.05为差异具有统计学意义。结果:1.血清骨转化标志物检测5组大鼠血清P1NP含量显著差异,MT组P1NP含量较CT组明显下降,组间对比（P＜0.05）;MT组与AT、ET及AET组比较P1NP含量均明显降低（P=0.000,＜0.05）;AT与ET组均值相当（P=0.898,＞0.05）;AT组与AET组比较,差异具有统计学意义（P=0.012,＜0.05）;ET组与AET组比较（P=0.018,＜0.05）;5组大鼠血清β-CTx含量比较:MT组中β-CTx含量较CT组升高（P=0.000,＜0.05）;MT组与AT、ET及AET组比较其含量明显升高（P=0.000＜0.05）,AT组与ET组比较含量相当,差异不具有统计学意义（P=0.916,＞0.05）;AT、ET组与AET组比较（P＜0.05）;5组大鼠血清CTx-1含量比较:MT、AT及ET组与CT组比较其含量增高（P=0.000,＜0.05）;MT组与AT、ET及AET组比较其含量明显升高（P＜0.05）,AT组与ET组比较,差异不具有统计学意义（P=0.992,＞0.05）;AT、ET组与AET组比较（P＜0.05）;2.组织形态学观察股骨头大体形态观察:CT组股骨头外观完整、圆润光滑;MT组部分股骨头外观出现不同程度变形,软骨表面部分凹陷,软骨下出现大片暗红色坏死区域,部分股骨头出现小面积浅表软骨破坏甚至软骨剥离;AT组股骨头外观完整,小部分可见暗红色坏死区域;ET组股骨头外观完整,小部分出现坏死;AET组股骨头外观完整,圆润光滑,未发现软骨下暗红色坏死区域。组织学观察:CT组骨小梁粗壮、排列整齐;MT组骨小梁明显变细、排列紊乱稀疏,大量骨小梁发生断裂,连续性低,骨小梁上出现大量空骨陷窝,周围大量细胞浸润;AT组骨小梁结构较MT组改善,骨小梁稍变细,排列较连续规则,可见少量断裂骨小梁,空骨陷窝数量较MT组明显减少;ET组与AT组骨小梁结构及空骨陷窝数量相仿,骨小梁不同程度变细,少量断裂骨小梁;AET组骨小梁粗壮、结构完整、偶见空骨陷窝数量。3.Micro-CT结果Micro-CT结果显示,5组大鼠股骨头不同组间存在显著差异。MT组与CT比较BV/TV、Tb.Th、Tb.N显著降低（P＜0.05）,BS/BV、Tb.Sp增加（P＜0.05）,说明模型组骨量明显丢失,骨小梁变细,间隔增宽,激素诱导股骨头坏死模型建立成功;AT组、ET组与MT组比较BV/TV、Tb.Th、Tb.N有所增加（P＜0.05）,AT组、ET组与MT组比较BS/BV、Tb.Sp明显减少（P＜0.05）,说明单独使用阿托伐他汀钙或促红细胞生成素干预确实在一定程度上降低了股骨头的骨量丢失,对骨小梁起到保护作用;AET组与AT组、ET组比较,骨小梁变化BV/TV、Tb.Th、Tb.N增加,而BS/BV、Tb.Sp减少（P＜0.05）;CT组与AET组比较,AET组略有减低（P＞0.05）,说明联合用药对骨小梁的保护优于单一用药。4.空骨陷窝率及股骨头坏死率比较MT组空骨陷窝率明显高于CT、ET、AT及AET组（P＜0.05）差异具有统计学意义,且股骨头坏死率也明显增加（90%）;AET组空骨陷窝率小于AT组及ET组（P＜0.05）,股骨头坏死率明显下降（10%）;AT组与ET组间比较空骨陷窝率（P＞0.05）,股骨头坏死率相当（40%与30%）。结论:1.模型组与空白组比较P1NP降低,CTx-1及β-CTx显著升高,骨小梁结构也明显降低,脂多糖+甲强龙可以简单有效快速建立大鼠激素性股骨头坏死模型。2.阿托伐他汀钙、促红细胞生成素可以使P1NP含量升高,降低β-CTx及CTx-1含量,通过抑制破骨细胞和促进成骨细胞增殖分化,改善骨小梁结构强度,对激素引起的股骨头坏死有一定预防作用。3.阿托伐他汀钙联合促红细胞生成素对大鼠股骨头骨小梁的改善,及促进成骨、抑制破骨,都优于单一药物,对激素性股骨头坏死的预防作用优于单一药物。