【摘 要】
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利用差异筛选法分别以玉米叶片和成熟花粉的poly(A)RNA反转录制备探针,筛选玉米成熟花粉cDNA文库,得到一个克隆命名为λ-17.将λ-17用EcoRI酶切,回收中间的插入片 段ZM17,克
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利用差异筛选法分别以玉米叶片和成熟花粉的poly(A)RNA反转录制备探针,筛选玉米成熟花粉cDNA文库,得到一个克隆命名为λ-17.将λ-17用EcoRI酶切,回收中间的插入片 段ZM17,克隆到载体pGEM7Zf(+)上,构建质粒命名为p7ZM17.经过DNA序列分析,该cDNA的 长度为1136bp.根据测序结果推测总读框架,将该cDNA的一段(从ATG到TGA)三联码对应构建到表达载体pGEMEX-1上,进行原核表达,得到蛋白ZM54.Western结果表明该基因在玉米根 、茎、叶、花粉、种子等器官都有表达,且蛋白比ZM54大.Southern杂交结果表明该基因在玉米基因组中可能是以多拷贝的形式存在的.Northern杂交结果表明该基因是组成型表达的,在玉米花粉、花药、根、叶片中表达水平很高且相当,mRNA的大小约为1.9Kb.以ZM17为 探针筛选玉米成熟花粉cDNA文库,得到一个克隆ZM18,该序列长度为1292bp,根据DNA序列 推断氨基酸序列,共有272个氨基酸,但是无完整的开放总读框架.以ZM17为探针筛选玉米 基因组文库,得到一个克隆λ-5,构建到质粒pGEM3Zf(+)上,将得到的质粒命名为p3ZM5. 分别用各种常用酶如BamHI、EcoRI等对质粒进行酶切处理,绘制限制性内切酶图谱,并通过Southern blot初步确定了该cDNA片段在基因中的位置.
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