目的:两粤檀,来源于豆科黄檀属植物两粤黄檀(Dalbejgia benthomii Prain)含树脂的木质藤茎。主产于我国海南、广东、广西等地区,东南亚等地亦有分布。具有活血、通经的功效,可用于治疗跌打损伤,筋骨疼痛,月经不调,痛经等症。海南黎族等民间习惯用其泡茶或浸酒,内服用于防治心血管及胃肠道疾病,外敷用作刀伤、烧烫伤、虫蛇叮咬等伤口创面的止血、消炎及生肌药。此外,两粤檀因具有芳香气味,人们常用于熏香祛除蚊虫,净化空气及抗瘟疫,在我国的香业上常被用于制作名贵香料和工艺品。现代研究表明,两粤檀具有抗菌、抗炎及抗氧化等多种药理活性。作为我国南方民间常用中药,两粤檀具有悠久的药香两用历史。然而,目前对两粤檀的研究较少,中国药典及地方标准均未收载。为合理的开发利用该药用资源、确保临床用药安全,本课题以两粤檀为研究对象,采用传统及现代科学技术手段对两粤檀原植物形态、性状、显微及薄层色谱、检查项及浸出物进行系统研究,并对其挥发油及总黄酮含量、挥发油化学成分、总黄酮提取工艺及挥发油的抗菌作用进行探索。最终拟定两粤檀质量标准草案,初步建立两粤檀质量标准。方法:1.生药学鉴别研究采用原植物鉴别方法研究两粤檀原植物形态特征。通过眼观、手摸、鼻闻、口尝等传统性状鉴定方法对两粤檀药材性状特征进行归纳总结。采用显微鉴定方法研究两粤檀三向切面组织构造、粉末及解离组织显微鉴别特征。采用薄层色谱法考察两粤檀最佳提取及展开条件,建立两粤檀薄层色谱鉴别方法。2.检查项及浸出物测定依据《中国药典》2015年版四部通则项下规定方法,测定30批不同产地两粤檀药材水分、总灰分、水溶性及醇溶性浸出物含量,并根据试验结果制定两粤檀药材水分、总灰分及浸出物含量限度。3.含量测定采用水蒸气蒸馏法提取不同产地两粤檀挥发油并测定其含量,以芦丁为对照品,采用紫外可见分光光度法测定不同产地两粤檀药材中总黄酮含量。4.挥发油GC-MS分析采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对不同产地两粤檀挥发油中化学组分进行分析。5.两粤檀总黄酮提取工艺考察在单因素试验结果的基础上,采用响应面法优化两粤檀总黄酮提取工艺,筛选出总黄酮提取的最优条件。6.两粤檀挥发油体外抗菌作用研究采用滤纸片扩散法对两粤檀挥发油的抗菌活性进行筛选,并运用二倍稀释法测定两粤檀挥发油对白色念珠菌的最小抑菌浓度。结果:1.生药学鉴别研究总结归纳两粤檀原植物形态、性状、显微及薄层色谱方面的主要鉴别特征。(1)原植物鉴别特征:羽状复叶,小叶2～3对,近革质,卵形或椭圆形,先端钝而微缺,基部楔形,上面无毛,下面略被微柔毛;圆锥花序腋生,花萼钟状,花冠白色;荚果薄革质;种子呈肾形。(2)性状鉴別特征:不规则圆柱形或长条片块状;表面木纹粗而明显,呈浅棕、红棕或棕黑色;断面研可见导管小孔,具有花香、蜜香及椰香等多种特殊香气。(3)显微鉴别特征:横切面木射线细胞宽1～4列,多2～3列,导管散生,多单孔,偶见2～11个径列复管孔;切向纵切面木射线非叠生,细胞宽1～4列,多2～3列,稀5列,高5～35个细胞;径向纵切则面木射线细胞异型性,横向排列成带状,轴向薄壁细胞组织叠生;粉末中可见木纤维、导管、水射线、木薄壁细胞及草酸钙方晶;解离组织中可见木纤维细胞、导管细胞、木薄壁细胞及木射线细胞。(4)建立了两粤檀薄层色谱检识方法。以甲苯:乙酸乙酯:乙酸(9:3:0.02)为展开系统,两粤檀对照药材作对照,10%硫酸乙醇溶液为显色剂,结果显示,样品展开后分离度好,斑点清晰。2.检查项及浸出物测定30批两粤檀药材样品中,水分测定范围为7.03%～12.98%,平均值为9.30%;总灰分含量范围为1.26%～6.33%,平均值为3.29%;水溶性浸出物范围为2.80%～7.58%,平均值为5.10%;醇溶性浸出物含量范围为28.50%～48.56%,平均为39.39%。根据测定结果,结合生产实际情况,拟定了两粤檀检查项及浸出物限度标准,即水分不得超过13.0%、总灰分不得超过7.0%、水溶性浸出物不得低于3.0%、醇溶性浸出物不得低于28.0%。3.含量测定30批两粤檀药材样品中挥发油含量在0.28%～2.37%之间,根据测定结果,初步拟定两粤檀挥发油得率不低于0.30%(mL/g);30批两粤檀样品中总黄酮含量为1.18%～6.25%。4.挥发油GC-MS分析30批两粤檀药材挥发油中共鉴定出109种化合物,主要为倍半萜类、烯类、醇类、醚类、酯类化合物。油中主成分为榄香素,其次为甲基丁香酚,两者含量之和占总成分含量的60%以上,此外,尚含有1,2-二甲氧基-4-N-丙基苯、芳樟醇、威士忌内酯、异榄香脂素及顺式-β-古巴烯等微量成分。5.总黄酮提取工艺考察两粤檀总黄酮最佳提取条件为提取温度50℃,提取时间60 min,乙醇体积分数60%,液料比50:1,此条件下两粤檀的总黄酮提取率为4.51%。6.挥发油体外抗菌作用研究两粤檀挥发油对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及白色念珠菌具有不同程度的抑菌作用,且其对白色念珠菌的最小抑菌浓度>12.50 mg/mL。结论:本课题对两粤檀质量标准相关方面进行系统性研究,初步拟定了两粤檀药材质量标准草案。所建立的两粤檀原植物形态、性状及显微鉴别特征描述准确,特征明显。薄层色谱鉴别操作简便,分离效果好,特征性强。拟定的水分、总灰分和浸出物含量限度合理。挥发油及总黄酮含量测定方法操作简便,结果准确,重现性好。总黄酮提取的优选工艺稳定可行、操作简单。因此,本文研究成果可为两粤檀质量控制及深入研究提供理论基础,同时为民间药用资源的合理开发、利用提供参考依据。