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目的:检测Akt/GSK3β信号通路相关分子蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、糖原合成激酶3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK3β)在小鼠生理性孕酮撤退月经样改变过程中子宫角组织的表达,以及分别在月经发生的关键时期前、后(即孕酮撤退后12 h和16 h)回植孕酮对该信号通路的影响,从而探讨该信号通路在月经期子宫内膜崩解和修复过程中的作用及孕酮调控作用。方法:120只未交配健康成年雌性C57BL/6J小鼠去势,经历雌孕激素序贯疗法及在子宫角注射无菌花生油诱导蜕膜化49h后取出孕酮皮埋管,模拟生理性孕酮撤退,此点记为孕酮撤退0 h。其中90只小鼠随机分为9组,分别在孕酮撤退后0 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h、32 h、40 h、48 h(48 h为小鼠生理性孕酮撤退周期)颈椎脱臼处死收集子宫角。另外30只小鼠分为三组进行孕酮回植实验:1216 h组(孕酮撤退后12 h回植16 h处死)、1224 h组(孕酮撤退后12 h回植24 h处死)、1624h组(孕酮撤退后16 h回植24 h处死)。通过q RT-PCR法检测子宫内膜组织中Akt、GSK3βm RNA表达,Western blot和免疫组织化学检测总Akt(t-AKT)、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化GSK3β(p-GSK3β)蛋白的表达和定位。结果:1、Akt/GSK3β信号通路相关分子在小鼠生理性孕酮撤退月经样改变模型子宫内膜中的表达:孕酮撤退后各组小鼠子宫内膜组织中t-Akt蛋白表达量无明显差异(P>0.05),而Akt m RNA和p-Akt(Ser473)蛋白表达量在孕酮撤退后逐渐降低且在20 h达到最低后又逐渐增加;GSK3βm RNA和p-GSK3β(Ser9)蛋白在孕酮撤退后表达先增加,8 h达到高峰(P<0.05)后有所下降且24 h表达量最低,然后在修复期又逐渐增加。免疫组化结果显示,p-Akt和p-GSK3β蛋白在小鼠子宫组织中表现出相似的表达分布模式,主要广泛散在表达于蜕膜化区域的基质细胞及腺上皮和腔上皮细胞中,在蜕膜化区域周边稍有集中分布呈带的趋势。2、月经发生早期阶段孕酮回植对Akt/GSK3β信号通路相关分子的影响:月经发生早期阶段的3个组(12 h组、1216 h组和16 h组)中,Akt与GSK3βm RNA表达具有显著相关性(r=0.819,p<0.01),1216 h组Akt与GSK3βm RNA表达量与16 h组表达量大致相等(p>0.05),且均低于12 h组(p<0.05);t-Akt蛋白在12 h组、1216 h组和16 h组中表达均无明显差异(p>0.05),而p-Akt、p-GSK3β蛋白表达趋势一致(r=0.867,p<0.01),与12 h组相比,1216 h组表达量显著增高(p<0.05),而16 h组蛋白表达量低于12 h组和1216 h组(p<0.05);3、月经发生晚期阶段孕酮回植对Akt/GSK3β信号通路相关分子的影响:月经发生晚期阶段的3个组(1224 h组、1624 h组和24 h组)中,Akt与GSK3βm RNA表达均无明显差异;t-Akt蛋白表达也无明显差异(p>0.05),而1224 h组中p-Akt和p-GSK3β蛋白表达较强,1624 h组和24 h组表达量较低,特别是在24 h组基本检测不到。结论:1.孕酮撤退所诱导的小鼠子宫内膜崩解及随后的子宫内膜修复可能受Akt/GSK3β信号通路的调控。2.在月经发生关键时期之前回植孕酮可能是通过非转录机制快速激活Akt/GSK3β信号通路及其下游级联反应,从而逆转月经发生,而16h回植则不能或不能完全阻断月经的发生。