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目的：负载维生素D3海藻酸纳米粒(sSAN-VD3)是海藻酸经油酸改性后依据分子自组装原理制备的纳米粒与VD3结合的制剂。本实验主要研究sSAN-VD3对大鼠佝偻病模型的预防作用及其在小鼠体内药代动力学特点,并与VD3进行比较。方法：一.sSAN-VD3抗佝偻病作用研究1.大鼠在避光条件下,喂饲维生素D缺乏的饲料35天,建立大鼠佝偻病模型。2.在建模的同时对大鼠分别灌胃给予sSAN-VD3低剂量(1.70mg·kg-1·d-1含VD315.0μg)、sSAN-VD3高剂量(4.2 mg·kg-1·d-1含VD337.5μg)、维生素D3(VD3)低剂量(15.0μg·kg-1·d-1)、VD3高剂量(37.5μg·kg-1·d-1)。连续给药35天。3.检测指标：观察记录大鼠的基本情况(体重、毛发、活动度、进食量)；用全自动生化分析仪测定大鼠血清中钙(Ca)、磷(P)和碱性磷酸酶(AKP);采用固相夹心法酶联免疫吸附实验检测大鼠血清中25羟基维生素D3(25-(OH)VD3)含量和血清骨碱性磷酸酶(Bone Alkaline Phosphatase BAP)活性；用双能X线骨密度仪检测股骨骨密度(Bone Mineral Density BMD);利用电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP)检测骨矿含量；采用钼靶软X线机拍摄骨X线图像；胫骨骨骺病理切片。二.sSAN-VD3在小鼠体内药代动力学研究1.将KM小鼠在闭光条件下喂饲维生素D缺乏的饲料15天后,分别灌胃给予sSAN-VD3(222mg·kg1相当于VD32mg)和VD3(2mg·kg-1)。分别于给药后2、4、8、16、24、48h时摘取小鼠眼球取静脉血。2.血清VD3浓度及药动学参数测定：采用乙醇沉淀血清中蛋白,四氯己烷提取,用高效液相色谱法(HPLC)检测血清中VD3浓度,同时进行精密度试验,回收率试验。用DAS软件处理实验结果得出各项药动学参数。结果：1.佝偻病模型组大鼠喂饲5周后体重明显低于正常对照组,血清AKP、BAP活性明显增高,血清P、25-(OH)VD3含量及股骨BMD则显著降低(P<0.05)；骨X线图像显示佝偻病模型组大鼠胫骨骨骼细小,骨密度减低,骺板增宽；佝偻病模型组胫骨增生层软骨细胞肥大,增多,排列紊乱,细胞层增。表明大鼠佝偻病模型成功建立。2.与佝偻病模型组大鼠比较,各预防给药组大鼠体重、血清P、骨BMD均有所增加,sSAN-VD3高、低剂量组和VD3高剂量组大鼠血清BAP活性降低,骨矿P、25-(OH)VD3水平明显升高,与模型组差异显著(P<0.05),骨X线图像显示与正常对照组相似；低剂量的sSAN-VD3组大鼠的血清BAP、25-(OH) VD3及股骨BMD等三项指标与相同用量的VD3组大鼠比较均有显著性差异(P<0.05),显示出更明显的抗佝偻病作用。3.采用高效液相色谱法检测VD3浓度,结果显示VD3峰形良好,与其他代谢物有很好的分离,内源性杂质影响较少,基线平稳,在血清中的保留时间为10.393min,最低检测限位0.025ug/ml,在0.025-0.8ug/ml的范围内均呈良好的线性关系,平均回收率>90%,精密度和稳定性RSD%<15%。表明高效液相色谱法可以作为血清VD3浓度的检测方法。4.维生素D3和负载维生素D3的海藻酸纳米粒达峰时间Tmax(h)分别为9.6±3.578h、12.800±4.382h;吸收半衰期T1/2ka分别为3.740±1.620h、6.095±1.697h;分布半衰期T1/2a(h)分别为5.874±2.564、7.583±3.00；消除半衰期T1/2B(h)分别为13.657±3.070、15.320±5.825；曲线下面积AUC(0-tn)(mg/L*h)分别为9.018±0.784、14.035±0.764。结论：1.sSAN-VD3和VD3口服用药对大鼠佝偻病模型均有预防作用,在低剂量(VD315.0μg·kg-1·d-1)时sSAN-VD3抗佝偻病作用较VD3更明显。2.与VD3比较,sSAN-VD3时量曲线下面积(AUC)增加,半衰期延长。提示自组装海藻酸钠纳米粒作为VD3的载体可促进VD3的吸收利用,延长其作用时间,从而增强VD3的抗佝偻病作用。