背景与目的中药马钱子(又名番木鳖),具有抗炎止痛,软坚散结,消肿活血,通经活络等功用,从马钱子当中提取的吲哚型结构的生物碱称为马钱子碱,是重要有效成分之一。在临床上马钱子碱被广泛应用在风湿痹痛、抑制肿瘤以及缓解癌痛等疾病治疗中。临床研究表明,在体外马钱子碱不但可以明显地抑制多种细胞增殖,诱使多发性骨髓瘤,乳腺癌、结肠癌、肝癌等多种癌细胞发生凋亡。人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)是常用的进行血管内皮细胞功能实验的细胞。VEGF和Eph A2是两种重要的血管内皮细胞标志物,VEGF作为血管内皮细胞的存活因子与特异性有丝分裂原,同时是作为血管生成的一种重要调节因子,Eph A2是受体酪氨酸激酶家族的一员,但超正常值呈现在恶性肿瘤疾病类。新生血管在肿瘤的发生和转移中是至关重要的一个环节。由内皮细胞从已存在的血管当中形成新血管,建立新血管网络,过程及其繁琐复杂,其中关键环节就是内皮细胞的迁移以及管的形成。该实验通过观察马钱子碱对HUVECs增殖活性和细胞凋亡,及血管内皮生长因子(VEGF)和上皮细胞激酶A2(epithelial cell kinase A2,Eph A2)的表达变化的影响,探讨其中的诱导作用机制,从而为临床使用马钱子碱治疗肿瘤患者提供实验依据。方法常规培养HUVECs,分为空白对照组、马钱子碱低(10μmol/L)、中(20μmol/L)、高(40μmol/L)剂量处理组,CCK-8法检测不同浓度马钱子碱对HUVECs细胞活力影响,通过划痕实验检测HUVECs的迁移改变,观察细胞增殖情况。Hoechst 33258细胞免疫荧光、流式细胞术Annexin V/PI双染法检测马钱子碱对HUVECs细胞凋亡变化影响,蛋白印迹法(Western blot)分别检测马钱子碱浓度依赖性对HUVECs细胞VEGF和Eph A2蛋白表达变化。结果⑴马钱子碱可以浓度依赖性的抑制HUVECs增殖,划痕实验表明马钱子碱可抑制HUVECs的迁移;⑵Hoechst 33258细胞免疫荧光和流式细胞术均表明马钱子碱呈浓度依赖性促进HUVECs凋亡,Western blot结果表明马钱子碱呈浓度依赖性的方式下调HUVECs中VEGF和Eph A2的蛋白表达。⑶图像分析表明显示,随着浓度升高,相比较于空白对照组,马钱子碱(10、20、40μmol/L)处理组VEGF/GAPDH和Eph A2/GAPDH蛋白表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),高浓度马钱子碱组中VEGF和Eph A2蛋白表达相比于低浓度组和空白组具有显著差别(P<0.05,P<0.01)。结论马钱子碱对HUVECs的增殖和迁移具有抑制作用,诱导细胞凋亡,抑制血管生成。机制可能与下调VEGF和Eph A2表达有关。