论文部分内容阅读
周围神经缺损比较常见,临床上应用最广的解决方式是自体神经移植。自体神经移植是临床上治疗周围神经缺损的“金标准”,但自体神经移植存在着很大的缺陷,如供区感觉障碍、自体神经来源有限及遗留手术疤痕等问题,对于较长的或粗大的神经缺损,自体神经移植难以满足需要。随着周围神经组织工程的兴起,自体神经来源不足的问题可望解决。目的:1.采用SD大鼠的雪旺细胞(SC)作为周围神经组织工程的种子细胞,在体外分离培养,探索体外培养及增殖雪旺细胞的方法。2.选取生长状况和纯度较好的第三代细胞,将经组织酶消化下来的细胞移植到单纯壳聚糖和复合FK506壳聚糖两种支架材料上,与第四代单纯细胞培养作为对照,观察雪旺细胞与支架材料的生物相容性。方法:1.取SD大鼠双侧的坐骨神经,预变性后,剪碎至1mm3大小的组织块,单酶消化法进行分离培养,Geneticin液抑制成纤维细胞生长,低浓度酶快速消化传代进一步纯化雪旺细胞,用光镜进行形态学观察、S-100蛋白进行鉴定。2.取生长状况较好的第三代细胞,经组织酶消化下来的细胞移植到上述两种支架材料上,对照组继续传代培养以作对照,用MTT法(四甲基偶唑盐微量酶反应比色法)比较不同支架上细胞的生长活力,光镜观察细胞形态和S-100蛋白免疫鉴定细胞纯度。结果:1、通过上述方法分离培养获得了经S-100蛋白鉴定纯度为85%的第三代雪旺细胞,细胞数量为2.764×107/ml,细胞形态多数为梭形。2、雪旺细胞在复合FK506壳聚糖组纯度为93%,单纯壳聚糖组纯度为89%,第四代单纯培养组纯度为76%。3、单纯第四代雪旺细胞形态大部分呈梭形,少部分为三角形,细胞活力一般,细胞OT值为0.1293,细胞排列不规则;单纯壳聚糖培养组梭形细胞比例更大,形态更规则,细胞活力较好,细胞OT值为0.1568,细胞排列呈现栅栏状;复合FK506壳聚糖组细胞形态最规则,细胞活力最好,细胞OT值为0.1805,细胞排列成典型的漩涡状或栅栏状。结论:1、SD大鼠坐骨神经中分离培养雪旺细胞来源确实,取材方便,可以作为周围神经组织工程试验研究的种子细胞来源,采用单酶消化法、Geneticin液抑制成纤维细胞生长,可以获得较高纯度的雪旺细胞。2、雪旺细胞与壳聚糖支架材料生物相容性好,FK506可促进细胞生长。