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【背景】多发性骨髓瘤是一种发生于B细胞的恶性造血系统肿瘤，传统的化疗在最初可有一定的反应，但瘤细胞最终对药物耐药。骨髓瘤细胞定居在骨髓，几乎不出现在外周血及其它组织器官中，这提示与其所处的骨髓微环境密切相关。骨髓基质细胞作为骨髓微环境的主要成份之一，对于骨髓瘤细胞的影响越来越引起研究者的重视。已有研究表明，骨髓基质细胞借助于细胞表面的多种粘附分子通过配体-受体方式与骨髓瘤细胞相互结合，有利于瘤细胞定居在骨髓中，并且产生相互作用。但骨髓基质细胞对骨髓瘤细胞影响，是通过直接还是间接的方式或两者综合作用，尚未完全定论。目前国内外较多的研究主要集中在两者粘附后骨髓基质细胞通过产生IL-6对骨髓瘤细胞的增殖及耐药产生影响，至于其它作用方式对骨髓瘤细胞的影响如何，有待于进一步探讨。 在本研究中，我们以非IL-6依赖的人骨髓瘤细胞株RPMI8226为靶细胞，将正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL与RPMI8226细胞共培养，观察两者相互粘附后HFCL细胞对RPMI8226细胞增殖的影响及共培养后RPMI8226细胞对化疗药物敏感性的改变。并采用新近发展起来的跨室联合培养技术(Transwell coculture)，对两类细胞的作用途径做进一步探讨。第四军医大学硕士学位论文 [目的1观察正常人骨髓成纤维样基质细胞HFCL对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及化疗敏感性的影响。 【方法】建立RPMI8226细胞和HFCL细胞直接接触及间接接触(Transwen组)的共培养体系，以单独培养的RPMI8226细胞为对照组。MTT法检测HFCL细胞与RPMI8226细胞粘附率;台盼蓝拒染法测定RPMI8226细胞的生长曲线;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的变化;瑞氏一吉姆萨染色后进行分裂指数(Ml)测定;Western Blot检测RPMI8226细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达;MTT法检测RPMI8226细胞对不同细胞毒药物的敏感性。 【结果】①RPMI8226细胞与HFCL细胞直接接触共培养1小时后，两者的粘附率为29.4%;②与对照组相比，生长曲线显示直接接触组RPMI8226细胞生长受抑，而非直接接触组(Transwell组)无变化:③培养72小时后，流式细胞仪检测细胞周期结果示:对照组Gl期细胞占33.6%，S期占52.1%:直接接触组Gl期细胞增高至40.4%，S期细胞减少至40.8%，与对照组相比差别显著 (P<0.01);Transwell组GI期细胞占30.6%，S期细胞占49，l%，与对照组相t匕无明显差异(P>0.05);④培养l、2、3、4、5天，细胞分裂指数显示，对照组分别为:1.4%、3.4%、3%、1.8%、1.6%;与HFCL共培养直接接触组1 .2%、2.6%、2%、0.8%、0.4%，低于对照组:⑤培养72小时后，Westem Blot检测结果示:HFCL与RPMI8226细胞直接接触组与对照组相比增殖细胞核抗原(PCNA)表达下调。⑥与HFCL共培养72小时后，量效曲线显示:RPMI8226细胞对长春新碱、米托葱醒、阿霉素、拓扑替康的敏感性降低。 [结论1①正常人骨髓成纤维样基质细胞HFCL通过直接接触能抑制骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖，阻止其细胞周期的运行:而用Transwen inserts将两者隔开后，对其增殖无明显影响。②成纤维样基质细胞HFCL与骨髓瘤细胞RPMI8226直接接触共培养后，可以使RPMI8226细胞对多种化疗药物的耐受性增强。