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近年来,结石和痛风的发病率越来越高,如何从膳食防护的角度开发具有防治结石和痛风的功能性食品是当前的关注的热点之一。柚子汁和青梅汁均为富含有机酸的强碱性食品。柚子(Citrus grandis)是芸香科(Rutaceae)柑桔属(Citurs)水果,在我国有悠久的栽培历史。柚子因其独特的芳香,清爽的口感,备受人们的青睐。而且柚子营养丰富,药用价值也高,但长期以来国内对柚子的深加工和功能性的研究不多。青梅(Prunus mume Sieb.et Zucc.)是具有中国特色的果品之一,营养价值高,资源也很丰富,梅文化源远流长。但我国对梅制品的研发投入不足,国内市场发育不良。
本课题组在对前期青梅化学素的研究过程中时发现,青梅果以及非果提取物具有良好的抑制体外草酸钙结晶形成、生长和聚集的能力;以梅花总黄酮为代表的青梅非果提取物能显著地降低血液尿酸水平和治疗痛风,具有较高的开发价值.但由于受梅花来源和价格的双重限制,需要寻找来源广阔、风味优良、功效协同的配伍材料,以指导功能性食品的研发。
本课题正是基于这种背景提出的,从柚子汁和青梅汁的有机酸组分入手,采用高效液相色谱法进行定性和定量分析,并通过体外模拟试验,评价两种果汁和梅花总黄酮对草酸钙结石的抑制能力,同时研究其对高尿酸血症的防治作用。现将主要研究结果和结论归纳如下:
(1)柚子汁与青梅汁中有机酸组分的检测采用高效液相色谱法同步测定柠檬酸、苹果酸,琥珀酸、乳酸、草酸、酒石酸、抗坏血酸和马来酸。色谱柱为Agilent TC-C18柱,流动相为含1.5%甲醇的0.01 moL/LKH2PO4-H3PO4缓冲溶液(pH=2.75),流速为1 mL/min;柱温为30℃,检测波长为210 nm。从柚子汁粉和青梅汁粉中检出了7种有机酸成分,总量合计分别为182.81 mg/g和365.85 mg/g,其中柠檬酸含量均为最高,分别为176.60mg/g和300.32 mg/g;青梅汁的总酸和柠檬酸含量是柚子汁的一倍左右。
(2)黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制及抗氧化活性评价用体外评价试验考察柚子汁、青梅汁和梅花总黄酮对XOD活性的抑制作用,并分别采用DPPH自由基法、铁离子还原法(FRAP)和血液总抗氧化能力测定法评价其抗氧化活性。结果显示,梅花总黄酮对XOD的半抑制浓度(IC50值)为85.45μg/mL,清除DPPH自由基的能力强于竹叶黄酮,但弱于芦丁;还原铁离子的FRAP值为3.38mmoL/mg,是芦丁的1.44倍和竹叶黄酮的1.29倍;血液总抗氧化能力的测定结果从强到弱依次为:维生素C>梅花总黄酮>竹叶黄酮>芦丁。研究表明,梅花总黄酮具有优良的生物抗氧化能力和显著的XOD抑制活性。而两种果汁对黄嘌呤氧化酶的抑制作用和抗氧化活性均较弱。
(3)抑制草酸钙结石的体外模拟实验采用扫描电子显微镜(SEM)、红外光谱(FTIR)等方法研究两种果汁和梅花总黄酮在氯化钠体系中对草酸钙晶体生长的抑制作用。结果表明,在所试浓度范围内(0.01~1.0 mg/mL)柚子汁具有抑制晶体成核和晶体生长的能力,且随着试样浓度的升高,抑制作用逐渐增强;生成的晶体以三水草酸钙(COT)为主,含有少量的二水草酸钙(COD)。青梅汁的高浓度组(1.0 mg/mL)具有显著抑制草酸钙晶体生长和团聚的作用,但不具有诱导COD形成的作用。梅花总黄酮的中浓度组(0.1 mg/mL)的晶体生成数量最少,具有一定的抑制晶体成核的作用,且能诱导COD形成,但不具有抑制晶体团聚生长的作用。柚子汁与梅花总黄酮复配对草酸钙结晶形成的抑制作用强于青梅汁与梅花总黄酮复配。
(4)对小鼠高尿酸血症的防治作用用腹腔注射氧嗪酸钾的方法建立小鼠高尿酸血症模型,灌胃给予两种果汁和梅花总黄酮试样(500 mg/kg体重),连续16 d,测定小鼠血清中尿酸水平和黄嘌呤氧化酶活性。结果显示模型组小鼠的血尿酸含量和XOD活性均显著高于正常对照组,提示遣模成功。柚子汁、青梅汁和梅花总黄酮试验组均能显著降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平和XOD活性,且柚子汁和青梅汁的效果不弱于梅花总黄酮。研究结果表明这两种富含有机酸的果汁和梅花总黄酮对小鼠高尿酸血症均有较好的防治效果。
综上所述,梅花总黄酮具有优良的生物抗氧化活性和显著的黄嘌呤氧化酶抑制作用,柚子汁、青梅汁和梅花总黄酮对于草酸钙晶核的形成、晶体的生长和团聚具有显著的抑制作用,并对高尿酸血症的模型小鼠表现出良好的治疗效果,其作用可以互补或叠加。表明这几种食源性功能素材可望在开发防治人体结石和痛风的功能性食品中发挥积极作用。