缺氧诱导成骨细胞VEGF的表达及其对成骨细胞增殖及分化的影响

来源 :锦州医学院 辽宁医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leoncici617
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目的:本研究通过在缺氧条件下培养成骨细胞诱导VEGF的表达,从细胞及分子水平探讨其对成骨细胞增殖及分化的影响,为临床上治疗骨缺损、骨缺血性坏死及骨折的修复提供实验依据。 方法:本实验从新生SD大鼠颅骨组织中分离出成骨细胞,使用酶消化法进行培养。当细胞传至第二代时,建立成骨细胞缺氧模型,将培养细胞分为缺氧组和正常氧组(对照组),实验指标的检测均在传代培养的第二代时进行。在培养的不同时期分别观察两组细胞生长形态;用台盼蓝染色法分别计数培养1、3、5、7天的细胞数;用流式细胞仪检测缺氧0(对照组)、1、3、5天的细胞凋亡率;在两组细胞培养3天时,用改良钙钴法检测两组细胞的ALP阳性率,用免疫组织化学方法检测两组细胞的骨钙素的表达;用骨钙素放射免疫法分别检测两组细胞培养的前3天的骨钙素含量;用计算机图象分析仪对两组培养的前3天细胞的VEGF免疫组化染色切片阳性细胞的平均灰度进行定量分析;用激光共聚焦显微镜对两组培养的前3天细胞的VEGF的光密度值作定量分析。用SPSS统计学软件对上述检测指标作统计学分析。 结果:缺氧组的细胞数在第1、3、5、7天均少于对照组,在第1和第3天,P<0.05,差异有显著性,在第5和第7天,P<0.01,差异有明显显著性;缺氧0(对照组)、1、3、5天细胞凋亡率逐渐增高,P<<0.01,差异有明显显著性;培养3天时缺氧组成骨细胞的ALP阳性率大于对照组,P<0.01,差异有明显显著性;培养3天时,两组细胞的骨钙素免疫组化染色均为阳性;培养的前3天,两组细胞的骨钙素含量逐渐增加,且缺氧组的骨钙素含量均高于对照组,在培养的第1和第3天,P<0.05,差异有显著性,在培养的第2天,P<0.01,差异有明显显著性;在培养的前3天,缺氧组VEGF免疫组织化学染色阳性细胞的平均灰度均低于对照组,随缺氧时间增加,平均灰度逐渐降低(P<0.01),差异有明显显著性,而平均灰度与染色深度成反比,即随缺氧时间的延长,VEGF的表达逐渐增加;在培养的前3天,激光共聚焦显微镜检测出的缺氧组细胞的VEGF的光密度值均高于对照组,且随缺氧时间的延长,VEGF的表达逐渐增加,P<0.01,差异有明显显著性。 结论:缺氧抑制成骨细胞细胞数的增加同时促进成骨细胞的凋亡;缺氧(1~3天)诱导成骨细胞VEGF的高表达并促进成骨细胞的分化。
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