论文部分内容阅读
目的:利用体外实验研究阳和汤含药血清干预人乳腺癌细胞迁移与侵袭的分子生物学机制,进一步明确c-Met/NF-κB/CXCL1在乳腺癌中的调控作用,为今后乳腺癌的分子靶向治疗提供新思路,探索阳和汤对治疗乳腺癌的临床应用价值。方法:(1)阳和汤含药血清(不同浓度)处理MDA-MB-231细胞24 h后采用Transwell细胞侵袭实验、划痕愈合实验研究阳和汤含药血清是否会影响乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭、迁移运动与修复的能力,Western blot检测MDA-MB-231细胞中c-Met、p-c-Met、NF-κB(p65)蛋白表达的改变,ELISA法检测CXCL1的表达情况。(2)应用c-Met抑制剂SGX523,下调c-Met的表达,检测阳和汤含药血清对SGX523作用的影响,进而研究阳和汤含药血清对MDA-MB-231的影响是否通过调节c-Met来实现。采用Transwell细胞侵袭实验、划痕愈合实验检测阳和汤含药血清对SGX523应用后的MDA-MB-231细胞侵袭、迁移运动与修复能力的影响,Western blot检测细胞中c-Met、p-c-Met、NF-κB(p65)蛋白的表达,ELISA法检测CXCL1的表达。(3)利用NF-κB抑制剂PDTC,下调NF-κB的表达,检测阳和汤含药血清对PDTC作用的影响,进而研究阳和汤含药血清对MDA-MB-231的影响是否通过调节NF-κB来实现。采用Transwell细胞侵袭实验、划痕愈合实验检测阳和汤含药血清对PDTC应用后的MDA-MB-231细胞侵袭、迁移运动与修复能力的影响,Western blot检测细胞中c-Met、p-c-Met、NF-κB p65蛋白的表达,ELISA法检测CXCL1的表达。结果:(1)随着阳和汤含药血清处理浓度的增加,阳和汤含药血清抑制细胞侵袭与迁移的作用逐渐增强,同时,MDA-MB-231细胞中c-Met、p-c-Met、NF-κB p65、CXCL1蛋白的表达明显降低,呈浓度依赖性。(2)应用c-Met抑制剂SGX523可增强阳和汤含药血清对细胞侵袭与迁移的抑制作用,及增强对细胞中c-Met、p-c-Met、NF-κB p65、CXCL1蛋白表达的下调作用。(3)利用NF-κB抑制剂PDTC可增强阳和汤含药血清对细胞侵袭与迁移的抑制作用,及增强对细胞中CXCL1、NF-κB p65蛋白表达的下调作用,但对c-Met、p-c-Met表达无明显影响,说明c-Met是NF-κB p65的上游。结论:(1)阳和汤含药血清可抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231中c-Met、NF-κB的活化,下调c-Met、NF-κB及其下游CXCL1的蛋白表达水平;(2)阳和汤抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移与侵袭的机制可能为通过抑制c-Met/NF-κB/CXCL1的活性来实现的。