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第一部分:表达分泌型sTβRⅡ胞外区-RANTES融合基因重组腺病毒的构建与鉴定 目的:构建表达分泌型sTβRⅡ胞外区-RANTES融合基因重组腺病毒并鉴定其在肿瘤细胞的表达。方法:(1) RT-PCR法扩增小鼠TβRⅡ胞外区和RANTES基因;(2) 重叠PCR法扩增sTβRⅡ胞外区-RANTES融合基因;(3) 将融合基因克隆至pDC316载体,采用AdMax Adenovirus Vector Creation试剂盒构建表达融合基因重组腺病毒;(4) 表达融合基因重组腺病毒转染小鼠肺腺癌L795细胞系,Western Blot法鉴定细胞内表达。结果:(1)经测序证实RT-PCR正确扩增了小鼠TβRⅡ胞外区、RANTES基因;(2) 经测序证实重叠PCR正确扩增了sTβRⅡ胞外区-RANTES融合基因;(3) 重组质粒pDC316/融合基因经酶切鉴定正确,与pJM17双质粒共转染获得表达融合基因重组腺病毒,病毒滴度为8×1010pfu/ml:(4) 转染后的LA795细胞经Western blot法鉴定有相应的特异性条带出现。结论:(1) 成功构建表达分泌型sTβRⅡ胞外区-RANTES融合基因重组腺病毒;(2) 表达融合基因重组腺病毒可在LA795细胞内表达。 第二部分:表达分泌型sTβRⅡ胞外区-RANTES融合基因重组腺病毒抗肿瘤作用的实验研究 目的:探讨表达分泌型sTβRⅡ胞外区-RANTES融合基因重组腺病毒抗肿瘤作用。方法:(1) 重组腺病毒Ad-TβRⅡ胞外区、Ad-RANTES、Ad-sTGFβRⅡ胞外区-RANTES转染LA795肿瘤细胞,ELISA法检测转染后细胞培养