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【目的】
1.研究3型固有淋巴细胞(group 3 innate lymphoid cells，ILC3)在狼疮肾炎(lupus nephritis，LN)中的表达情况及其与疾病严重程度的相关性。
2.探讨LN中肾脏ILC3的来源和上游调控机制。
3.明确ILC3在LN进展中的作用。
4.阐明ILC3促进LN进展的机制。
【方法】
1.通过流式细胞术(flow cytometer，FCM)分析LN患者及健康对照(healthy control，HC)者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中ILC3的比例，并分析ILC3与临床指标的相关性。
2.通过FCM分析MRL/lpr小鼠模型中ILC3随疾病进展的动态变化，并分析肾脏ILC3与炎症损伤的相关性。
3.通过免疫荧光检测MRL/lpr小鼠肾脏ILC3的定位和增殖情况，及其与肾脏异位淋巴组织(ectopic lymphoid structure，ELS)的空间关系。
4.FCM检测在疾病不同阶段LN模型小鼠小肠、肠系膜淋巴结(mesenteric lymph node，MLN)、PBMC和肾脏中ILC3及亚型(CXCR4+、CX3CR1+、CCR6+ILC3)的数量。通过qPCR对比MRL/MpJ及MRL/lpr小鼠肾脏Cxcl12、Cx3cl1、Ccl20的水平。
5.通过骨髓嵌合模型特异性下调或输注ILC3上调MRL/lpr小鼠中的ILC3，观察LN小鼠生存情况、狼疮样皮损及免疫器官的变化；通过病理染色及免疫荧光评估肾脏损伤；通过ELISA检测小鼠尿肌酐及尿蛋白的变化。
6.通过FCM检测ILC3对MRL/lpr及cGVHD(chronic graft versus host disease)小鼠体内B细胞分化、抗体产生及T细胞数量的影响。通过免疫荧光检测ILC3对MRL/lpr小鼠肾脏ELS的影响。
7.通过ILC3与B细胞共培养，明确ILC3在体外对B细胞分化及抗体生成的直接作用。
【结果】
1.LN患者PBMC中ILC3的比例显著高于HC，且与24h尿蛋白、SLEDAI评分、血清IgM呈正相关，与血清C3、C4及白蛋白呈负相关。
2.随着LN的发生及进展，小鼠PBMC、肾脏及脾脏中ILC3的数量逐渐升高，且肾脏ILC3数量与IL-6及TNF-α水平呈正相关。
3.LN小鼠肾脏ILC3主要位于ELS区域，鲜有表达Ki-67。
4.随着LN的发生及进展，MRL小鼠小肠、MLN、PBMC及肾脏中CXCR4+、CX3CR1+及CCR6+ILC3的数量逐渐升高。且MRL/lpr小鼠肾脏中Cxcl12、Cx3cl1、Ccl20的mRNA水平显著高于MRL/MpJ小鼠。
5.下调ILC3后，MRL/lpr小鼠肾脏IgG及IgM沉积显著减少，尿蛋白显著下降，生存时间明显延长。上调ILC3后，MRL/lpr小鼠出现明显的狼疮样皮损，脾脏及淋巴结显著增大；肾脏炎症细胞浸润更明显、新月体更多、肾脏IgG及IgM沉积更严重；尿蛋白及尿肌酐显著升高。
6.下调ILC3后，MRL/lpr小鼠PBMC、肾脏及脾脏中浆细胞、IgM+B细胞及Tfh细胞的比例均明显降低。而上调ILC3后，MRL/lpr小鼠PBMC、肾脏及脾脏中浆细胞、IgM+B细胞、IgA+B细胞及Tfh细胞的数量均显著增多。同时，上调ILC3的cGVHD小鼠PBMC、肾脏及脾脏中浆细胞的比例显著升高。此外，上调ILC3后，MRL/lpr小鼠肾脏ELS数量更多且面积更大。
7.在ILC3的刺激下，体外的B细胞分化为浆细胞的比例更高，且合成及分泌的IgM更多。
【结论】
1.LN患者PBMC中ILC3表达升高，且与疾病的严重程度相关。
2.在LN发生发展过程中，肠道ILC3增多，并可能在趋化因子的作用下归巢至肾脏。
3.ILC3可能通过促进Tfh增多、B细胞成熟和抗体生成、肾脏ELS形成等机制促进LN的肾脏组织及功能损伤。
1.研究3型固有淋巴细胞(group 3 innate lymphoid cells，ILC3)在狼疮肾炎(lupus nephritis，LN)中的表达情况及其与疾病严重程度的相关性。
2.探讨LN中肾脏ILC3的来源和上游调控机制。
3.明确ILC3在LN进展中的作用。
4.阐明ILC3促进LN进展的机制。
【方法】
1.通过流式细胞术(flow cytometer，FCM)分析LN患者及健康对照(healthy control，HC)者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中ILC3的比例，并分析ILC3与临床指标的相关性。
2.通过FCM分析MRL/lpr小鼠模型中ILC3随疾病进展的动态变化，并分析肾脏ILC3与炎症损伤的相关性。
3.通过免疫荧光检测MRL/lpr小鼠肾脏ILC3的定位和增殖情况，及其与肾脏异位淋巴组织(ectopic lymphoid structure，ELS)的空间关系。
4.FCM检测在疾病不同阶段LN模型小鼠小肠、肠系膜淋巴结(mesenteric lymph node，MLN)、PBMC和肾脏中ILC3及亚型(CXCR4+、CX3CR1+、CCR6+ILC3)的数量。通过qPCR对比MRL/MpJ及MRL/lpr小鼠肾脏Cxcl12、Cx3cl1、Ccl20的水平。
5.通过骨髓嵌合模型特异性下调或输注ILC3上调MRL/lpr小鼠中的ILC3，观察LN小鼠生存情况、狼疮样皮损及免疫器官的变化；通过病理染色及免疫荧光评估肾脏损伤；通过ELISA检测小鼠尿肌酐及尿蛋白的变化。
6.通过FCM检测ILC3对MRL/lpr及cGVHD(chronic graft versus host disease)小鼠体内B细胞分化、抗体产生及T细胞数量的影响。通过免疫荧光检测ILC3对MRL/lpr小鼠肾脏ELS的影响。
7.通过ILC3与B细胞共培养，明确ILC3在体外对B细胞分化及抗体生成的直接作用。
【结果】
1.LN患者PBMC中ILC3的比例显著高于HC，且与24h尿蛋白、SLEDAI评分、血清IgM呈正相关，与血清C3、C4及白蛋白呈负相关。
2.随着LN的发生及进展，小鼠PBMC、肾脏及脾脏中ILC3的数量逐渐升高，且肾脏ILC3数量与IL-6及TNF-α水平呈正相关。
3.LN小鼠肾脏ILC3主要位于ELS区域，鲜有表达Ki-67。
4.随着LN的发生及进展，MRL小鼠小肠、MLN、PBMC及肾脏中CXCR4+、CX3CR1+及CCR6+ILC3的数量逐渐升高。且MRL/lpr小鼠肾脏中Cxcl12、Cx3cl1、Ccl20的mRNA水平显著高于MRL/MpJ小鼠。
5.下调ILC3后，MRL/lpr小鼠肾脏IgG及IgM沉积显著减少，尿蛋白显著下降，生存时间明显延长。上调ILC3后，MRL/lpr小鼠出现明显的狼疮样皮损，脾脏及淋巴结显著增大；肾脏炎症细胞浸润更明显、新月体更多、肾脏IgG及IgM沉积更严重；尿蛋白及尿肌酐显著升高。
6.下调ILC3后，MRL/lpr小鼠PBMC、肾脏及脾脏中浆细胞、IgM+B细胞及Tfh细胞的比例均明显降低。而上调ILC3后，MRL/lpr小鼠PBMC、肾脏及脾脏中浆细胞、IgM+B细胞、IgA+B细胞及Tfh细胞的数量均显著增多。同时，上调ILC3的cGVHD小鼠PBMC、肾脏及脾脏中浆细胞的比例显著升高。此外，上调ILC3后，MRL/lpr小鼠肾脏ELS数量更多且面积更大。
7.在ILC3的刺激下，体外的B细胞分化为浆细胞的比例更高，且合成及分泌的IgM更多。
【结论】
1.LN患者PBMC中ILC3表达升高，且与疾病的严重程度相关。
2.在LN发生发展过程中，肠道ILC3增多，并可能在趋化因子的作用下归巢至肾脏。
3.ILC3可能通过促进Tfh增多、B细胞成熟和抗体生成、肾脏ELS形成等机制促进LN的肾脏组织及功能损伤。