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研究目的：1.观察脑缺血再灌注损伤时过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptors, PPARs)各亚型蛋白(PPARα、PPARβ/δ、PPARγ)表达的变化以及PPARs激动剂对PPARs表达的影响,并探讨PPARs的改变在脑缺血再灌注损伤中的意义；2.以PPARs三亚型中的PPARRγ为研究对象,观察脑缺血再灌注损伤时其核移位的变化,以及PPARγ激动剂和拮抗剂对核移位的影响,并初步探讨PPARγ核移位在脑缺血再灌注损伤中的意义；3.观察脑缺血再灌注损伤时12/15-脂氧酶(12/15-lipoxygenase,12/15-LOX)表达及其产物15-HETE含量的改变,以及12/15-LOX抑制剂和产物对PPARγ表达的影响,初步探讨12/15-LOX途径在PPARγ表达调控中的意义。研究方法：1.将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注模型组(I/R组)、治疗组。制作大鼠MCAO/R模型,缺血60min,再灌注24h。治疗组于MCAO/R前30min给予PPAR全激动剂苯扎贝特(Bezafibrate, Beza)。使用神经功能缺损评分、2%氯化三苯四唑(2,3,5-triphenyltetrazolium, TTC)染色对苯扎贝特在脑缺血再灌注损伤中的作用进行评价,免疫组化、Western blot检测PPARs各亚型蛋白表达情况；2.将大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注模型组(I/R组)、PPARγ激动剂干预组(Ros组)、PPARγ抑制剂干预组(GW9662组)。其中I/R组,缺血均为60min,又根据再灌注时间分为2h、4h、8h、24h组。Ros组、GW9662组均于MCAO/R前30min给予相应的药物。使用神经功能缺损评分、TTC染色对PPARγ激动剂、抑制剂在脑缺血再灌注损伤中的作用进行评价,免疫组化、Western blot检测PPARγ表达水平,免疫荧光检测PPARγ在神经细胞内的定位；3.将大鼠随机分为Sham组、I/R组(60min/24h)、Baicalein干预组、15-羟基二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic,15-HETE)干预组。Baicalein干预组、15-HETE干预组均于MCAO/R前30min给予相应的药物。使用免疫荧光双标检测和Western blot检测12/15-LOX、PPARγ表达,酶联免疫法检测15-HETE含量。研究结果：1.与假手术组相比,缺血60min再灌注24h(1)引起平均梗塞体积为44.30%,同时神经功能缺损评分增加,P<0.01,差异有统计学意义；(2)使脑组织PPARs各亚型表达均增加,分别增加了1.47倍、3.52倍和2.25倍,差别有统计学意义(免疫组化检测t值分别为8.63、9.29和13.62,Western blot检测t值分别为8.16、9.24和6.43,均P=0.000)；同时PPARs各亚型免疫阳性细胞增加主要表现在缺血侧半暗带区域,而非缺血侧(对侧)表达没有明显改变。与I/R组相比,PPAR全激动剂Beza(1)显著降低脑梗死体积,平均减少54.36%,差异有统计学意义(t=7.69,P=0.000),同时mNSS降低,P<0.01,差异有统计学意义；(2)进一步增加PPARs各亚型表达,分别增加了95.45%、183.47%、224.61%,差异有统计学意义(免疫组化检测t值分别为7.36、5.64和10.50,Western blotting检测t值分别为13.02、17.52和13.64,均P=0.000)；同时不但使缺血侧PPARs免疫阳性细胞增加,而且使非缺血侧(对侧)也增加。2. (1)I/R组与Sham组相比,①PPARγ总蛋白表达：Western blot检测显示,再灌注2h组未见明显改变(t=-0.701,P>0.05,差异无统计学意义),再灌注4h组、8h组、24h组PPARγ总蛋白表达水平均增高,且呈再灌注时间依赖性增强(t=-15.749,-16.715,-22.839,均P<0.05,差异有统计学意义)；免疫组化检测与Western blot结果一致；②PPARγ成分蛋白表达：Western blot检测显示,Sham组胞浆、胞核内均有PPARγ表达；I/R后,再灌注2h、4h、8h、24h组PPARγ在胞核内的表达增加(与Sham组相比,t=-11.343、-27.191、-24.861、-25.75,均P<0.05),同时在胞浆内的表达减少(与Sham组相比,t=7.197、9.031、10.777、13.78,均P<0.05),且PPARγ的核移位改变呈再灌注时间依赖性；免疫荧光检测与Western blot结果一致；(2)与I/R(60min/24h)组相比,①Ros组梗死体积减小了48.27%,而GW9662组梗死体积增加了39.52%；神经功能缺损评分也呈现一致的改变(均为P<0.05,差异均有统计学意义)；②PPARγ总蛋白和成分蛋白表达：Western blot检测显示,与I/R组(60min/24h)相比,PPARγ激动剂组(Ros组)PPARγ的总蛋白表达水平显著增高(t=-23.465,P<0.05),核蛋白表达水平亦显著增高(t=-33.788,P<0.05),浆蛋白表达水平则降低(t=6.428,P<0.05),差异均有统计学意义；而PPARγ抑制剂组(GW9662组)PPARγ的总蛋白表达水平显著降低(t=29.403,P<0.05),核蛋白表达水平亦显著降低(t=22.414,P<0.05),浆蛋白表达水平则增高(t=-6.826,P<0.05),差异均有统计学意义；免疫荧光检测与Western blot结果一致。3. (1)与Sham组相比,Western blot检测显示,I/R(60min/24h)组12/15-LOX总蛋白表达增高(t=-8.195,P<0.05,差异有统计学意义)；免疫荧光检测显示,12/15-LOX的表达主要位于缺血半暗带,且其表达位置与PPARγ具有一致性；同时酶联免疫检测显示,I/R组12/15-LOX产物15-HETE的含量明显增加(t=-12.787,P<0.05,差异有统计学意义)。(2)与I/R(60min/24h)组相比,同时给予不同剂量Baicalein (150mg/kg、200mg/kg)使PPARγ总蛋白(t=7.253,8.61,P<0.05)、核蛋白(t=15.361,26.922,P<0.05)表达均降低,浆蛋白(t=-17.579，-25.719,P<0.05)表达增高,差异均有统计学意义；Baicalein 200mg/kg处理不同时间(缺血60min再灌注4h和24h)均引起PPARγ总蛋白(t=2.773,11.650,P<0.05)、核蛋白(t=4.313,37.468,P<0.05)表达水平均降低,浆蛋白(t=-2.553,-8.246,P<0.05)表达水平增高,差异均有统计学意义；(3)与I/R(60min/24h)组相比,12/15-LOX产物15-HETE干预组PPARγ总蛋白(t=-23.884,P<0.05)、核蛋白(t=-15.36,P<0.05)表达水平均增高,浆蛋白(t=5.86,P<0.05)表达水平降低,差异均有统计学意义。研究结论：1.局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织PPARs各亚型(PPARα、PPARβ/δ和PPARγ)表达增加,该改变可能是脑组织的一种代偿性神经保护反应；2.(1)脑缺血再灌注损伤可诱导PPARγ表达上调及核移位,最终引起细胞核内PPARγ表达水平增高,即PPARγ核活性增加；(2)I/R时PPARγ核移位的发生早于表达水平上调,相对于增加蛋白水平,可能是机体调节该转录因子的更为直接、快捷的方式；(3)PPARγ激动剂增强、PPARγ抑制剂抑制I/R诱导的PPARγ表达及核移位改变,表明I/R诱导的PPARγ表达及核移位改变可能与内源性PPARγ配体的释放有关；3.I/R时12/15-LOX表达和活性增加；12/15-LOX抑制剂和产物可分别抑制和促进缺血再灌注诱导的PPARγ改变,提示脑缺血再灌注时PPARγ的改变可能(至少部分)与12/15-LOX途径有关。