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目的通过特异性的不同内吞途径化学阻断剂研究EV71入侵人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH机制，从而为探讨EV71感染神经系统损伤的致病机理提供实验依据，同时为临床抗病毒治疗及疫苗的研发开辟新的思路。材料与方法1.病毒来源本实验所需的EV71，由重庆市疾病预防控制中心微生物检测所(病毒检测实验室)提供。2.细胞来源本实验所需的肿瘤细胞即人横纹肌肉瘤细胞株（RD）由重庆市疾病预防控制中心微生物检测所(病毒检测实验室)提供。人神经母细胞瘤细胞（SK-N-SH）由重庆医科大学附属儿童医院儿研所组织细胞培养室提供。3.实验分组实验分为4组，有空白组、阴性对照组、氯丙嗪(Chlorpromazine,CPZ)处理组、制霉菌素（Nystatin,NT）处理组。CPZ处理组采用10、15、20μΜ药物；NT处理组给予10、15、20μg/ml的药物；对照组不作药物预处理；空白组不作任何处理。各组分别预处理SK-N-SH细胞1h，然后EV71病毒株感染靶细胞1h，最后细胞培养在含有阻断剂的相应的培养基中。24小时后，收集细胞，TaqMan荧光定量RT-PCR验证EV71mRNA的表达。4.实验方法4.1EV71病毒培养、增殖及滴度的测定。4.2MTT法检测不同胞吞途径化学阻断剂对细胞增殖的影响。4.3TaqMan荧光定量RT-PCR验证EV71mRNA的表达情况。结果1.本实验成功地扩增出EV71病毒，病毒滴度为1×105TCID50。2. MTT法检测到随着药物浓度梯度的增加，SK-N-SH细胞的增殖受到抑制。3. TaqMan荧光定量RT-PCR结果表明SK-N-SH细胞易感于肠道病毒EV71型。4. TaqManQPCR结果显示CPZ能够抑制EV71mRNA的表达（Ρ〈0.05），NT对其影响不大（Ρ〉0.05）。结论初步推测EV71入侵SK-N-SH细胞是通过网格蛋白依赖性的内吞作用入胞。