【研究目的】炎症是组织受损时发生的最基本的免疫反应,在很多肿瘤发生阶段都会有炎症反应的出现。TNFα作为炎症反应的重要调控分子,在肿瘤的发生发展过程中起到了非常重要的作用。环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类共价闭合环状RNA,在人类的各种组织和细胞中广泛表达,其形成过程受到可变剪接等机制的调控。研究表明,许多circRNA可以作为促癌基因或抑癌基因来调控肿瘤的发生发展。因此,本文旨在探索炎症因子TNFα激活的相关信号通路在调控circRNA表达及影响肿瘤细胞恶性行为的具体分子机制。【研究方法】我们首先在宫颈癌细胞中利用深度测序技术获得了受炎症因子TNFα调控的circRNA表达谱,联合RNase R处理和Sanger测序验证了circRNA的存在性,利用RT-qPCR实验确定了circRNA的具体表达情况;通过RIP实验和S1-tag沉淀实验检测了circRNA与p65和p50蛋白的相互作用情况,选择了相互作用最明显的circDMD作为进一步的研究对象;通过RT-qPCR实验,Western blot实验,FISH实验和S1-tag沉淀实验探究了circDMD对p65,p50表达和核质分布的影响以及相互作用的具体位点;接下来我们用放线菌酮处理He La细胞后,通过Western blot实验检测了circDMD对p65和p50蛋白半衰期的影响,并进一步利用泛素化蛋白免疫共沉淀实验分析了circDMD对p65泛素化的影响;通过Western blot实验,泛素化蛋白免疫共沉淀实验,生物信息学软件分析,RT-qPCR实验,荧光报告系统分析实验探究了circDMD影响p65泛素化的具体机制;通过查阅相关文献发现VEGFR3的启动子受到NF-κB调控并将其作为后续的检测对象;通过RT-qPCR实验,NF-κB荧光报告系统分析实验检测了circDMD对NF-κB活性和VEGFR3表达的影响;通过生物信息学软件分析,FISH实验,Dot blot实验,DRIP实验,Western blot实验,双荧光素酶报告系统分析实验和免疫共沉淀实验分析了circDMD调控VEGFR3表达的具体机制;通过RT-qPCR实验和Western blot实验探索了炎症状态下circDMD高表达的原因及其对下游炎症相关分子表达的影响;最后,我们通过MTT实验,Western blot实验,Transwell实验,免疫荧光实验,小管形成实验,小鼠体内移植瘤实验和免疫组化实验探究了circDMD对宫颈癌细胞恶性行为的具体影响。【研究结果】我们通过深度测序及RT-qPCR实验检测发现了一个受炎症因子影响的新circRNA,circDMD。在TNFα刺激作用下,circDMD不仅可以促进p65,p50和IL6的表达,还可以促进并伴随p65和p50共同发生核转位。通过实验结果我们得知circDMD对p65表达的促进作用是通过mi R-4711-5p/KDM5A/SOCS1调控轴抑制其泛素化降解来实现的。circDMD转位到核内后可以结合到VEGFR3的启动子上形成R-loop结构,并以此稳定p65和p50在启动子上的结合从而促进VEGFR3的表达。此外,我们发现在炎症因子激活的状态下DHX9的表达受到抑制,从而促进了circDMD的形成及下游相关分子的表达,Poly I:C处理细胞后也得到了相同的结果。最后,我们通过功能相关实验确定了circDMD可促进肿瘤细胞增殖,转移,自噬和血管形成能力,体内实验结果也验证了过表达circDMD可以提高裸鼠的成瘤能力以及瘤体内血管形成的水平。【研究结论】我们发现炎症因子TNFα可以促进circDMD的表达,而高表达的circDMD可以激活经典的NF-κB信号通路并促进p65和p50发生核转位。circDMD伴随p65和p50转位到细胞核内后结合到VEGFR3的启动子区域形成R-loop结构,并帮助提高p65和p50在启动子上结合的稳定性,从而促进VEGFR3的表达。此外,circDMD可以促进肿瘤细胞的转移、自噬以及在体内外的增殖和血管形成能力,最终促进了宫颈癌的发生发展。