【摘 要】
：
目的:研究NYD-SP14及其相关蛋白相互作用的机制,探讨NYD-SP14在细胞生长,周期调控,精子发生和肿瘤发生和发展过程中的作用机制。 方法:运用生物信息学方法,分析NYD-SP14在不同物种中的同源性差异,通过RT-PCR分析NYD-SP14在小鼠多组织和在正常人及不育症患者精子样本中的表达差异,分析NYD-SP14及其相关蛋白在不同细胞中的表达情况;构建一系列NYD-SP14、PP2
论文部分内容阅读
目的:研究NYD-SP14及其相关蛋白相互作用的机制,探讨NYD-SP14在细胞生长,周期调控,精子发生和肿瘤发生和发展过程中的作用机制。 方法:运用生物信息学方法,分析NYD-SP14在不同物种中的同源性差异,通过RT-PCR分析NYD-SP14在小鼠多组织和在正常人及不育症患者精子样本中的表达差异,分析NYD-SP14及其相关蛋白在不同细胞中的表达情况;构建一系列NYD-SP14、PP2A的Aα亚单位、HRB2、HSP70的逆转录病毒载体和慢病毒载体,在永生化HEKTER细胞中筛选稳定表达的细胞株,观察其表达定位,验证NYD-SP14与PP2A的Aα亚单位（PP2R1A）、HRB2、HSP70之间的相互作用,通过流式细胞分析、划痕愈合实验和绘制生长曲线研究NYD-SP14及其相关蛋白表达对细胞生长、增殖和细胞周期的影响,推断NYD-SP14可能的生理学功能。利用生物信息学,构建在三联TPR结构的第十个外显子两端插入LOXP位点的NYD-SP14条件型基因敲除小鼠模型,进一步研究其在小鼠胚胎发育和个体发育中的作用。 结果:NYD-SP14在不同物种间广泛表达、高度保守;RT-PCR表明NYD-SP14在脑和睾丸中高表达,在正常人精子样本中表达量是不育症患者样本中表达量的18.5倍;进一步分析显示NYD-SP14在HELA、MCF-7等多种细胞中广泛表达,其相关蛋白HSP90Aα,HSP90Aβ,HSP90B,HSP70和HRB2在HEK293T和HEKTER中都有表达,因为NYD-SP14在睾丸和肿瘤细胞中广泛高表达,说明NYD-SP14可能在其相关蛋白的作用下,参与细胞生长调控。通过慢病毒载体和逆转录病毒载体构建pLenti-SP14-HA-IRES-GFP-Blast、pLenti-SP14-HA、pMIG-PP2R1A、MSCV-GFP-HSP70和pLenti-GFP-HRB2稳定表达细胞株,绿色荧光蛋白的亚细胞定位提示NYD-SP14,PP2R1A,HSP70在HEKTER的胞浆中存在共定位,而HRB2在细胞分裂不同时期定位于不同的部位,分裂期前定位在胞浆,分裂期后定位于胞核。通过WESTERNBLOT的方法对稳定表达细胞株进行验证,通过免疫沉淀证明PP2R1A和NYD-SP14存在相互作用。流式细胞周期检测表明过表达的PP2R1A会抑制细胞增殖,弱表达的PP2R1A对细胞增殖没有明显影响,NYD-SP14可以使细胞阻滞在S期,并诱导细胞凋亡,在PP2R1A高表达时,这种阻滞作用会加强。划线实验和细胞生长曲线也证明PP2R1A和NYD-SP14的表达会抑制细胞增殖,过表达PP2R1A的细胞中再感染NYD-SP14时,这种抑制作用最明显。成功构建NYD-SP14CKO质粒,经PCR鉴定,已获得NYD-SP14flox/+,NYD-SP14flox/flox及NYD-SP14+/–小鼠。 结论:小鼠NYD-SP14具有C端的三个连续TPR结构域,在小鼠多组织中广泛表达,脑和睾丸及肿瘤细胞中高表达。细胞试验验证它与PP2R1A和HSP70具有共定位,可以与PP2R1A发生相互作用,并诱导PP2R1A引起的细胞凋亡,说明NYD-SP14可能与PP2R1A具有协同作用,在HSP70/90和HRB2的参与下,共同调控细胞的周期生长。这些研究有助于揭示NYD-SP14在精子发生、细胞周期和肿瘤发生等方面的影响,而NYD-SP14CKO小鼠模型的建立也为进一步研究NYD-SP14在胚胎发育和个体发育中的作用奠定基础。
其他文献
信创产业是信息化关键技术的创新,当前中国经济和技术正面临内外交织的复杂形势,首先信息安全问题已刻不容缓,其次信息产业有巨大的市场,因此,中国信息技术创新之路是历史发展的必然选择,也是时代的脉搏!A集团70多年来始终致力于成为先进的信息科技产品和领先的解决方案和运营服务商,作为中国最早的IT品牌之一,为实现我国信息技术产业独立自主,将命运掌握在自己的手中有不可推卸的责任和义务。但是在信创业务的发展战
＜正＞为推动全党全社会深刻领悟“两个确立”的决定性意义，把学习贯彻习近平新时代中国特色社会主义思想进一步引向深入，中共中央宣传部组织编写了《习近平新时代中国特色社会主义思想学习纲要（2023年版）》（以下简称《纲要（2023年版）》）。全书对习近平新时代中国特色社会主义思想作了全面系统的阐述，
本文以冰箱中零度保鲜室及其中储存的母乳为研究对象,分析测试了零度保鲜室和冷藏室搁架中存放母乳的品质变化及相关理化指标变化,为零度保鲜技术对提升母乳的保鲜效果提供依据。研究表明,零度保鲜室的保鲜效果明显优于冷藏室搁架。其中,对比冷藏室搁架,零度保鲜室对母乳储存中的感官指标劣变减缓率在-4.46%到-13.04%之间;从酸化过程来看,与冷藏室搁架相比,零度保鲜室储存对母乳可滴定酸度劣变减缓率为-43.
【目的】探讨母乳在初乳（分娩后至产后7 d的母乳）、过渡乳（产后7～14 d的母乳）、成熟乳（产后14 d～10个月的母乳）、晚乳（产后10个月以后母乳）4个阶段分别置于室温3 h、4℃24 h、-18℃30 d、-18℃90 d储存后各营养成分的变化，从而筛选出最适合存储乳汁的方法。【方法】选择在凉城新村社区卫生服务中心建册，预产期为2019年1—6月，不属于“重点孕妇”标准中的任何1项表现的5
本论文围绕功能性多元无镉量子点的水相制备开展研究,通过绿色、温和的水相方法,将磁性金属元素掺入到量子点中,探究磁性元素掺杂对量子点光学性质的影响,以实现光学性质和磁学性能的有效平衡,进而实现双功能量子点的制备,以获得更好的应用;另一方面,通过包覆ZnS壳层,进一步增强多元无镉量子点的荧光强度和稳定性,并且通过有机硫源代替无机硫化钠包覆硫化锌壳层,进一步提高了量子产率,同时近红外发射峰出现红移,结合
电流变液（Electrorheological fluid,ER Fluid）是一种由绝缘液体和分散相颗粒组成的新兴智能材料,作为一类两相流体,它具有独特的ER效应。当有电场作用于ER悬浮液时,分布混乱的分散相固体微粒可以发生瞬时极化,使得颗粒相互吸引形成整齐的链状结构,并且这个过程是可逆的。因为它可以准确的通过电场的变化来影响屈服强度变化,从而达到工业生产所需要的状态,所以它在我国航空飞行、机械
信息技术应用创新产业全面推广，成为现象级风口.然而信创产品涉及技术路线广、种类繁多、应用实例不够丰富，电信运营商在推进信创工作过程中面临着信创产品选型困难的问题.因此，构建电信运营商信创产品体系框架和信创产品测评体系是必要且迫切的.不仅可以一点看全适用于运营商的信创产品生态全貌，快速掌握各技术栈中重点产品概况及同类型产品横向测评结果，还可以针对主要业务场景形成最佳实践与推荐清单，避免重复工作，实现
近年来,秉持对环境和生物友好的材料开发理念,纯有机室温磷光（PORTP,Pure organic room temperature phosphorescence）材料逐渐取代了价格昂贵并且存在生物毒性的金属配合磷光材料,PORTP材料的开发得到了全面关注。尽管经过长期努力研究,学者们已经设计合成了大量PORTP材料,可是由于分子本身的种种限制,大部分材料只拥有长寿命（τ≥100 ms）或者高效率
生命现象和生命活动规律的研究离不开实验。《义务教育生物学课程标准（2011年版）》要求一线工作者要不断地实现教学方法的创新,提升实验教学的质量和效率。但大量资料显示,初中生物学教学现状不容乐观。为改进初中生物学实验教学效果,笔者立足商河县初中生物学实验教学实际,在建构主义理论、“从做中学”等理论的指导下,利用问卷调查法、访谈法等方法,对济南市商河县初中生物学实验教学的现状进行了调查,从学校、教师、
胰腺是由内胚层发育而来的消化器官，广泛地参与了糖、脂、蛋白质代谢。胰腺的发育是一个动态连续的过程，受到多种信号途径以及转录因子的调控。肌醇依赖性激酶1α （Inositol requiring enzyme1α, IRE1α）是内质网膜上的跨膜蛋白，为内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress, ERS）过程中三种跨膜感受器之一，发生ERS时可以感受应激并通过介导未折叠蛋