东乡野生稻内生放线菌FORO54鉴定、全基因组测序及生物活性初步研究

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东乡野生稻(Oryza rufipogon Griff.)为迄今所发现的世界上分布最北的野生稻,具耐寒、抗旱、耐贫瘠、抗虫抗病等优良品质。本文以课题组前期分离获得的东乡野生稻内生放线菌FORO54为对象,采用形态结合分子生物学方法进行分类鉴定,开展全基因组序列测定、次级代谢产物合成基因簇分析及可能的代谢产物预测,并对其发酵液的抑菌活性和稳定性进行了初步研究。通过FORO54的16S rRNA基因序列在线比对和系统发育树构建,发现其与Micromonospora rosaria DSM 803~T(=NRRL No.3718~T=ATCC29337~T=SCC957~T)相似性较高;利用扫描电镜观察其菌丝及孢子,发现其符合小单孢菌特征;将Micromonospora rosaria DSM 803~T为对照菌,进行培养特征与生理生化特征比较,发现两者有明显差异,推测菌株FORO54为潜在小单孢菌属新种。开展FORO54全基因组测序,并利用比较基因组学,分析菌株FORO54与其他15株小单孢菌在25个COG功能分类上的差异,构建了16株菌的系统进化树,结果显示:FORO54与AM105菌株全基因组序列最为相似。GO注释及比较分析发现,FORO54菌株在免疫系统过程的基因数目要明显多于L5菌株,而L5菌株在营养库方面要比FORO54更具优势。开展了FORO54菌株发酵液抑菌活性和稳定性研究,结果表明:FORO54发酵液对金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)均具有较好的抑菌活性;对水稻稻瘟病菌(Pyricularia grisea sacc.)有轻微抑制作用,对芝麻尖孢镰孢菌(Sesame Fusarium Wilt pathogens)的抑制率达到80%,而对车前草菌核病原核盘菌(Plantain Sclerotinia scleroliorum)、油菜菌核病菌(Sclerotinia scleotiorum)、小麦赤霉菌(Gibberella saubinetti)、辣椒根腐霉(Chili root fusarium oxysporumf.)、水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)的抑制活性不明显。FORO54菌株发酵液在热处理、紫外灯照射、酸碱环境及胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K处理下较稳定,抑制水稻细菌性条斑病菌的活性保持良好。研究结果为今后其活性产物的分离、结构解析打下坚实基础。
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